菌种保存的方法共16页.pptVIP

基本原理 微生物具有容易变异的特性,因此,在保藏过程中, 必须使微生物的代谢处于最不活跃或相对静止的状 态,才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持 生活能力 低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的 重要因素,所以,菌种保藏方法虽多,但都是根据 这三个因索而设计的  1传代增养保藏法 口又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养 等(后者作保藏厌氧细菌用),培养后于4 6℃C冰箱内保存  将菌种接种在适宜的固体斜面堵养基上,待菌 充分生长后,车28C的冰箱中保藏 保藏时间依微生物的种类而有不同,霉菌、放 线菌及有芽孢的细菌保存2—4个月,移种一次。 酵母菌两个月,细菌最好每月移种一次。 ■优点是操作简单,使用方便,不需特殊设备 能随时检查所保癒的菌株是否死亡、变异与污 染杂菌等 缺点是容易变异;污染杂菌的机会亦较多。  2体石蜡程盖保藏法 口是传代培养的变相方法,能够适当延长保藏 时间,它是在斜面培养物和穿刺培养物上面 覆盖灭菌的液体石蜡,一方面可防止因培养 基水分蒸发而引起菌种死亡,另一方面可阻 止氧气进入,以减弱代谢作用。  中,使水海液体石蜡分装、灭菌,然后放在40°C温箱 基中培养, 韩能直的面 的斜面上 量以高出斜面顶端1cm为准(图Ⅶ-12),使菌种与空 (4)将试管直立,置低温或室温下保存(有的 微生物在室温下比冰箱中保存的时间还要长) 法实用而效果好。霉菌、放线菌、芽孢细菌可 酵母菌 孢细菌也可保藏 的脑膜炎球菌,在37℃温箱内,亦可保减3个月之久 必须直立放置,所占位置较大, 时也不便携  3,载体休藏法 是将微生物吸附在适当的载体,如 土壤、沙子、硅胶、滤纸上,而后进 干燥的保藏法,例如沙土保藏法和滤纸一 保藏法应用相当广泛。  滤纸保癒汽 将需要保存的菌种,在适宜的斜面培养基上培养,使 充分生 灭菌脱脂牛乳1-2m滴加在灭菌培养皿或试管内 取数环菌 制成浓悬液 (4)用灭菌镊子自安瓿管取滤纸条浸入菌悬液内,使其吸 饱,再放回至 (5)将安瓿管放入内有五氧化二磷作吸水剂的干燥器中 抽真空后封口,保存于低温 (6)需要使用菌种,取出滤纸,放入液体培养基内,置温 箱中培养 细菌、酵母菌、丝状真菌均可用此法保藏,前两者可保藏2 此法较液 冻干燥法简便,不需要特殊  沙上保藏法 (1)取河沙加入10%稀盐酸,加热煮沸30分钟,以去除其 中的有机质 (2)倒去酸水,用自来水冲洗至中性 (3)烘干,用40目筛子过筛,以去掉粗颗粒,备用 4)另取非耕作层的不含腐植质的瘦黄土或红士,加自来 水浸泡洗涤数次,直至中性 (5)烘于,碾碎,通过100目筛子过筛,以去除粗颗粒 (6)按一份黄土、三份沙的比例(或根据需要而用其他比 沙或全部用土 装入小试管或实酒 行无菌检查,直至证明无菌,方可备用。 用此法集米论漫种,酸和 养细  (9)于每支沙土管中加入约0.5( 使沙土润湿为宜)孢子悬液,以接种 (10)放入真空干燥器内 (11)抽检细菌生长情况和有无杂菌生 长 (12)用火焰熔封管口,放冰箱或室内干 燥处保存。每半年检查一次活力和杂菌情况 (13)需要使用菌种,复活培养时,取沙 土少许移入液体培养基内,置温箱中培养 此法多用手能产生狗子的做生物如霉菌 放线菌,因此在抗生素工业生产中应用 效果亦好,可保存2年左右,但应用于营养细 胞效果不佳  4,寄主倪藏法 口用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生 昒,如病毒、立克次氏体、螺旋体等,它们 必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传 代,此法相当于一般微生物的传代培养保藏 法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保 藏法与冷冻于燥保藏法进行保藏。