分子生物学-05-2-第二章染色体与DNA-7端粒复制.docVIP

PAGE 教学单元教案格式 第二章 补充内容 端粒复制 课程教案 授课题目：第4次大课 第二章 端粒复制 教学时数： 1 授课类型： eq \o\ac(□,√) 理论课 □ 实践课 教学目的、要求： 1、掌握线性DNA端粒的复制机制； 2、熟悉DNA端粒的结构与生物体寿命之间的关系 教学重点： 授课难点：端粒的复制机制 教学难点： 端粒的结构 教学方法和手段： 老师讲授为主：讲授式 ＋ 启发式 ＋ 提问式 以电脑幻灯片边演示边讲述为主，（白板课件）辅以板书（黑板板书） 注：以下内容按实际需要进行取舍 本课程要求能够有多媒体教室。 教学内容与教学设计： 第一课时 线性染色体端粒DNA的复制 1. 问题的提出 线性DNA复制后的问题 线性DNA复制后在其新生链的5’ 对于线性DNA来讲，复制时，由于受DNA聚合酶特性限制，子代DNA链的最后一个片断去除引物后，无法填补空隙，易造成子代DNA链的缩短。 染色体末端缩短 对于染色体来讲，由于RNA引物的原因，DNA聚合酶一定会留下染色体末端的一段DNA（即一段端粒）使其不被复制。那么真核细胞染色体末端的端粒就会随着细胞分裂而缩短。这个缩短的端粒传给子细胞后，随着细胞的再次分裂进一步缩短。 1.1 一般的解决办法 线状 DNA的复制5’末端短缩的解决模式 1、 从开始就采取环化的形式 －－－λ噬菌体 2、 象T7噬菌体一样采取连环分子的形式 利用自身线性DNA末端的重复序列－－ 通过末端互补形成连环分子 3、 最直接的办法－－－引入蛋白质直接从末端起始复制 如－－－腺病毒－2、phageΦ29、脊髓灰质炎病毒 4、 痘病病毒的末端由发夹结构连接 复制完成后错切连接 5、染色体端粒复制 T7噬菌体的末端复制 2 端粒 位于真核生物染色体末端（一条链的3￠-OH），由蛋白质和DNA（人类：“TTAGGG”重复序列）紧密结合的保护染色体末端的结构。 端粒功能： 避免染色体DNA链的缩短；防止染色体的融合或降解；维持染色体结构的稳定性和完整性。 位于真核生物染色体末端（一条链的3￠-OH），由蛋白质和DNA（人类：“TTAGGG”重复序列）紧密结合的保护染色体末端的结构。 端粒的生物学意义 （1）维持染色体结构的完整性，防止染色体被核酸酶降解及染色体间相互融和。 （2）防止染色体结构基因在复制时丢失，解决了末端复制的难题。 DNA复制时，DNA聚合酶必须在RNA引物基础上从5′向3′方向延伸，而5′端RNA引物去除后因无引物的存在而不能复制，结果每复制一次染色体末端将丢失一段序列。端粒的存在使每次丢失的仅为端粒的一部分，从而保护了染色体内部的结构基因。 （3）另外，有些研究还显示，端粒与核运动有关，可能对同源染色体的配对重组有重要意义。 染色体末端端粒随着每次细胞分裂逐渐缩短，直到不能分裂走向衰老。这就是人类细胞衰老的原因之一。但是人类的种系细胞一生中都能维持分裂、不断增殖。其原因在于：该细胞表达端粒酶。 端粒酶以自身一段RNA为模板，通过逆转录酶，转录出一段端粒片段并使之连接于染色体的端粒末端，使端粒不缩短，维持完整，从而保持了细胞的永生化生长。 在单细胞生物、多细胞生物的种系细胞中都显示出弱的端粒酶活性。而在人类正常体细胞均无端粒酶活性。值得注意的是，在绝大多数恶性肿瘤细胞中显示明显的端粒酶活性，这可能是肿瘤细胞具有永生性生长的原因之一。 3 端粒的合成主要依靠端粒酶来催化 端粒酶（telomerase）：是一种自身携带RNA模板的逆转录酶，可以催化合成端粒。实际上端粒酶是一种RNA-蛋白质复合体,它自身携带的RNA具有物种特异性，可以作为模板, 通过逆转录过程对该物种DNA末端进行延长 4端粒复制的爬行模型 复制后加工： 如下图所示：(a)端粒酶以其RNA为模板, 通过逆转录作用, 催化富含G链的延伸; (b)端粒酶向端粒新3′端移动,继续以其RNA为模板, 催化富含G的DNA母链延长; (c)端粒酶反复移位, 通过逆转录反应使端粒富含G链增长到足够长度; (d)富含C链的空缺部分不需要yinfa酶合成引物提供3′-OH, 而是富含G的链突出的寡脱氧核苷酸d(GGGGTTTTGGGG)通过非Watson-Crick配对方式自身的GGGG之间按G · G配对, 回折形成发卡并提供3′-OH; (e)由发卡引发富含C链在3′-OH以富含G链为模板, 由DNA聚合酶添加新的dNTP, 进一步延伸填补空缺, 间隙最后由DNA连接酶封口; (f) 这种带重复序列的端粒DNA与端粒蛋白结合后, 通过G·G配对自