分子生物学-14-1-第八章真核基因表达调控-2-反式因子.docVIP

PAGE 郜刚分子生物学教案 第8章 真核基因表达调控 课程教案 8.2.3 反式作用因子 是指调节一个基因表达的另一个基因的表达产物（蛋白质或者RNA），能识别或者结合在各类顺式作用元件核心序列上，参与调控靶基因转录效率的蛋白质 反式作用： 一个基因的产物控制另一个基因的表达的过程，称为反式作用， 要通过基因产物其合成的场所扩散到其发挥作用的另一个场所的 因此反式作用因子的编码基因与其识别或者结合的靶DNA序列一般不在同一个DNA分子上。 一、 反式因子根据作用的方式分为三类：page306 转录因子不单与基因上游的启动子区域结合，也可以和其它转录因子形成转录因子复合体来影响基因的转录 1.基础转录因子：basal factor 和RNA聚合酶一起结合于转录起始位点和TATA框，组成转录基本复合物(往往参与RNA聚合酶亚基)，无基因特异性 2.转录调节因子：activator 特异性地识别短的共有序列元件的转录因子，结合于启动子或增强子位点上。通过增加转录基本复合物结合于启动子的效率而起作用，因而增加了转录频率 组成型：使基因持续表达 诱导型：在特定的组织和特定时间被激活或合成，结合于应答元件 3.共调节因子：Coactivators 辅助，自身不和DNA结合，连接转录激活因子和转录基本复合物 反式因子根据作用的细胞特异性分为二类： ①通用转录因子：各类细胞普遍存在的转录因子。 如TATA box结合因子 TFIID、 GC box结合因子SP1 CAAT box结合因子CTF（CAAT box transcription factor ）。 ②组织特异性转录因子:与基因表达的组织特异性有很大关系。 8.1.3.4反式因子根据作用的序列相似性和三级结构分为5超类、20多个类，10几个超家族和几十个家族 反式因子与顺式元件的作用方式 往往以成环、扭曲、滑动、Oozing（渗透？）等形式通过以下4种方式实现对顺式元件的调控 ①表达式调节（蛋白质合成） ②共价修饰（磷酸化、去磷酸化） ③配体结合 ④蛋白质相互作用 反式作用因子的组合式调控作用(conbinatorial gene regulation) 多种反式作用因子通过不同的组合可以调控不同基因的表达。比如上游启动子元件结合蛋白与启动子结合蛋白共同作用调控基因表达 通过组合式调控作用，使得相关蛋白质发生磷酸化/去磷酸化/或者发生配体-受体结合/或者发生蛋白质更替等，从而实现多种反式作用因子的活性调节 转录因子一般有不同的功能区域，如DNA结合结构域与效应结构域。 二、 转录因子的结构域 DNA结合域 DNA-binding domain (BD), 转录活化域 Trans-activating domain (AD), 蛋白质-蛋白质结合域， 抑制域（repression domain）， 核定位信号（nuclear localization signals，NLS），信号检测结构域（signal sensing domain）， 二聚化结构域 1、 DNA结合结构域（识别或结合） （DNA binding domains） 目前发现14种 1、Helix-turn-helix 常结合CAAT盒 在Helix-turn-helix，HTH中有一类典型的结构叫“同源域” 比如果蝇的en，ftz，ubx 2、Zinc Finger 约30个aa组成，其中4个残基（4个cys,或两个cys两个his)与一个Zn2+配位 见于SP1，TF ⅢA等 锌指核酸酶介导的基因打靶（ZFN技术） 人工突变的锌指蛋白的每个锌指可以识别特定的GNN和ANN以及部分CNN和TNN三联体。多个锌指串联起来就可以识别一段特异的碱基序列，具有很强的特异性和可塑性。 把锌指蛋白与来自海床黄杆菌的一种限制性内切酶FokI融合在一起就形成了锌指核酸酶ZFN，可以用来进行基因修饰，比如基因打靶、基因敲除等，从而用于临床的基因治疗。 ZFN技术的改进TALEN技术 顺式元件与反式因子作用的分子本质是特异的氨基酸（序列）与特定的碱基（序列）相互识别并且结合 转录激活子类似蛋白效应因子（Transcription Activator-Like Protein Effector, TALE）是黄单胞菌属病原菌分泌到宿主植物细胞中的一种毒性蛋白，可以识别植物DNA，驱动基因表达。 TALE 蛋白中部的一段串联重复序列具有与目标DNA 序列特异识别及结合的能力， 串联重复序列由33-35 个氨基酸残基构成， 不同的TALE 蛋白的串联重复序列不同，是因为其中第12、13 位的氨基酸残基在不同重复单元中为可变氨基酸残基，被称为RVD（repeat-variab