Zeiss激光扫描共聚焦显微镜操作基础手册.docVIP

Zeiss 激光扫描共聚焦显微镜 操作手册 目录：?1 系统组成?系统组成及光路示意图?实物照片说明?2 系统使用?2.1 开机次序?2.2 软件快速使用说明?2.3 显微镜触摸屏控制?2.4 关机次序?3 系统维护?1 系统组成?激光扫描共聚焦显微镜系统关键由：电动荧光显微镜、扫描检测单元、激光器、电脑工作站及各相关附件组成。?系统组成及光路示意图：?电脑工作站?激光器?电动荧光显微镜 扫描检测单元?实物照片说明：?电动荧光显微镜?扫描检测单元?CO2 培养系统控制器?激光器?电脑工作站?2 系统使用?2.1 开机次序?（1）打开稳压电源（绿色按钮）?等候2 分钟（电压稳定）后，再开其它开关?（2）主开关 [ MAIN SWITCH ]“ON”?电脑系统 [ SYSTEMS/PC ]“ON”?扫描硬件系统 [ COMPONENTS ]“ON”?（3）打开 [ 电动显微镜开关 ]?打开 [ 荧光灯开关 ]?（注：含有5 档光强调整旋钮）?（4）Ar 离子激光器主开关 “ON”?顺时针旋转钥匙 至 “—”?预热等候约15分钟，?将激光器 [ 扳钮 ] 由“Standby”扳至?“Laser run”状态，即可正常使用?（5）打开 [ 电脑开关 ]，进入操作系统?注：键盘上也含有 [ 电脑开关 ]?2.2 软件快速使用说明?（1）电脑开机进入操作系统界面后，双击桌面共聚焦软件ZEN 图标?（2）进入ZEN 界面，弹出对话框：?“Start System”——初始化整个系统，用于激光扫描取图、分析等。?“Image Processing”——不开启共聚焦扫描硬件，用于已存图像数据处理、分析。?（3）软件界面：?1 功效界面切换：扫描取图（Acquisition）、图像处理（Processing）、维护（Maintain）?（注：Maintain仅供Zeiss专业工程师使用）?2 动作按钮；3 工具组（多维扫描控制）；4 工具具体界面；5 状态栏；6 视窗切换按钮；?7 图像切换按钮；8 图像浏览/预扫描窗口；9 文档浏览/处理区域；10 视窗中图像处理模块?动作按钮：?Single ——扫描单张图片、并在图像预览窗口显示。?Start ——开始扫描单张图片或一个试验步骤（1组图片，如XYZ、XYT 等）。?Stop ——暂停/结束扫描。?New ——建立一个新图像扫描窗口/文档。?激光连接情况检验?眼睛观察/相机/共聚焦LSM 光路切换（ZEN软件界面右上角）：?Ocular ——经过观察筒用眼睛观察。（激光安全保护装置自动阻断激光、保护眼睛。）?Camera ——光路切换至相机。?LSM ——共聚焦扫描成像光路。?显微镜设置：?“Ocular”——?“Light Path”——?点击物镜图标，选择物镜——?样品聚焦。?透射光控制（Transmitted Light Control）?反射光光闸控制（Reflected Light Shutter）?荧光激发块选择（Reflector）?共聚焦LSM 扫描设置?点击“LSM”（ZEN软件界面右上角），系统切换至共聚焦扫描光路：?光路设置：?Smart Setup —— 自动预设光路?选择“荧光探针”、“颜色”、扫描方法，?应用“Apply”。?（注：Fastest 为最快速扫描，多条激光谱线同时扫描。Best signal 为最好信号扫描，多条激光谱线顺序扫描。Best compromise 为兼顾速度和信号折中式扫描。）?扫描图像参数设置：?每个通道精细调整：?包含：?（1）Pinhole调整（通常设为1AU。该值越大，则信号越强，但共聚焦图像效果会降低。标准上，?在确保图像质量前提下，该值越靠近于1AU 越好）；?（2）Master Gain调整（增大则信号和噪音全部增强，减小则信号和噪音均减小。标准上，在确保图像质量前提下，Gain值越小越好）；?（3）Digital Offset调整（可扣除背景噪音，但标本信号也有一定程度扣除。标准上，在确保图像质量前提下，Digital Offset值越靠近于0越好）；?（4）Digital Gain调整（增大则信号和噪音全部增强，减小则信号和噪音均减小。标准上，在确保图像质量前提下，Gain值越靠近于1.0~1.2越好）；?（5）另外，对于每个通道，需要灵活调整激光强度（激光强度越高，则信号越强，但噪音也对应增强，同时标本更轻易被漂白或淬灭。标准上，在确保图像质量前提下，激光强度越低越好。）?选择可连续扫描、一边预览图像效果、一边精细调整各个