分子生物学：PCR基因扩增.pptVIP

“ ” “ ” PCR基因扩增 Polymerase Chain Reaction 目的与要求 实验原理 实验步骤 实验材料和耗材 思考题 一、目的与要求 1. 学习和掌握PCR反应的基本原理与实验技术。 背景 PCR技术是在1985年由美国PE-Cetus公司人类遗传研究室的Mullis 等发明的聚合酶链反应。这一技术具有划时代意义的。其原理类似于DNA的体内复制，只是在试管中给DNA的体外合成提供以致一种合适的条件。 二、实验原理 三、基本步骤 1、在PCR管内配制20μL反应体系： 例如下列加样体系 三、基本步骤 2、设置PCR反应循环程序 根据扩增的目的DNA片段的特点设置 具体程序 如下列程序 3、PCR扩增产物的电泳检测 参考实验 琼脂糖凝胶电泳 三、基本步骤 四、实验材料与设备 1、实验设备 PCR热循环仪 tip头、冰盒 PCR管 超纯水 DNA相对分子质量标准物 移液枪 2、试剂 （1）10×缓冲液 500mmol/l KCl 100mmol/l Tris?HCl (pH8.3 ,室温) 15mmol/l MgCl2 0.1% 明胶 （2）4×dNTP 1mmol/l dATP、1mmol/l dCTP、1mmol/l dGTP 1mmol/l dTTP （3）rTaq酶 5U/μL （4）DNA模板 1ng/μ