重组DNA文库的构建与筛选-讲义.ppt

前言 目的片段与载体链接构建重组DNA分子(第1,3章) 简单直接,常规 高等生物DNA的复杂性:真核生物,真菌,昆虫,植物,动物,人类 1)从复杂的基因组中分离单拷贝的基因。 2)从来源于复杂的总mRNA的cDNA文库中分离稀有的 cDNA克隆。 构建含完整基因组DNA或cDNA序列的有实用价值的重组DNA文库,主 要问题是足够的克隆数,确保基因组DNA中每一个序列存在于文库中 注意:防污染策略:电话克隆 重组DNA文库的构建与筛选  内容 重组DNA技术的发展简史 重组DNA技术的有关概念 重组DNA的基本原理和流程 重组DNA技术的应用 重组DNA文库的构建与筛选  内容 简史 概念 重组DNA的基本原理 应用 重组DNA文库的构建与筛选  重组DNA技术来源限制性核酸内切酶 1952年美国分子遗传学家S.E.卢里亚在大肠杆菌中发现一种 所谓限制现象——从菌株甲的细菌所释放的噬菌体能有效地 感染同一菌株的细菌,可是不能有效地感染菌株乙;少数被感 染的菌株乙的细菌所释放的同一噬菌体能有效地感染菌株乙可 是不能有效地感染菌株甲。 1974年美国学者W.阿尔伯对这一现象提出了解释,认为 通过噬菌体感染而进入细菌细胞的DNA分子能被细菌识别而分解 细菌本身的DNA则由于已被自己所修饰(甲基化)而免于被分解。 但有少数噬