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Bio-rad Gene PUISer XCell 电穿孔系统 一 Gene PuISer XCelI电穿孔系统介绍 电穿孔的过程中可以有2种波型来控制外界电压的变化，Gene PUISer Xcell可以 提供2种波型，即指数波和方波。 Exp Onen tial DeCay WaVe （指数波） 所谓指数波的方式，就是将已经充电到指定电压的电容进行快速的放电， 放电的 方式是以指数的形式进行的（如上面的 slide显示）。该种方式的电穿孔取决于 2 个参数，电场强度（kV∕cm）和时间常数（ms）。在实验过程中，采用具体的电击杯 调整电压即可调整不同的电场强度。此外，电容和电阻的具体值也可以在 Ge ne PUISer Xcell的界面上进行设置。 rTllrtO r TllrtO ?电容器充电到预定的电压（Vo）放电后，即向样品释放脉冲，细胞表面的电 压随时间按指数方式下降的 ?电容器的电压值达到峰值释放脉冲后迅速的衰减 ?电场强度E （V∕cm）是用来描述电击杯外界电场环境的一个参数（E=V∕d ） ?脉冲时间是一般用时间常数来进行衡量 （~37% Of V o，Vo∕e） ?脉冲的时间是由电阻和电容的大小所决定的 备注：PC module作用 PC（Parallel CaPaCitOr）模块的本质就是在放电回路中在样品上并联一套电阻。 在放电回路中设置PC模块的目的：如果实验样品具有很高的电阻值，那么脉冲 就需要维持相当长的时间，这样对细胞是会有损伤的，长时间的电场作用会导致 细胞的裂解。并联了 PC模块后对样品而言电击是的电压并没有变化，但是 PC 模块起到了分流的作用，可以使得脉冲的时间常数大大减小， 可有效的维持细胞 的活性。并联了 PC模块后，时间常数取决于该模块的电阻，电阻越小，那么放 电的时间也就越短。 Square Wave（方波） 对于某些细胞而言，采用指数波进行实验特别容易导致细胞的死亡。对于这种细 胞而言，采用方波的形式来进行电穿孔既可以进行有效的转染， 又可以很好的保 护细胞，维持细胞的活性。方波的形式通常用以下的参数来进行描述： 电压、脉 冲时间、脉冲次数和脉冲间的间隔时间。上述所有的参数都可以在 Ge ne PUISer Xcell的操作界面上方便的设置。 在实验结束后，Gene PUISer Xcell还可以显示实 验中这些参数的具体值。 方波的本质和指数波是一样的，区别在于电压还没有下降为0的时候，电容器的 放电已经被截止了。所有的方波都会有电压的细微下降， 以其始的电压值的百分 比计算。一般下降率不超过 5%。 Tlme ? 电容器的指数放电过程中被截止后就会形成方波， 其时间常数远大于脉冲 时间 ? 脉冲时间就是细胞被放电的时间 ? 脉冲是可以被反复释放的，在低压回路最多可以重复 10 次，在高压回路 最多可以重复 2 次 ? 脉冲的间隔时间就是指 2 个脉冲间的时间 ? 脉冲下降是指终止电压和起始电压值之间的差值 电容器的指数放电过程中被截止后就会形成方波， 但是采用不同电压的回路会形 成不同的方波脉冲。 采用方波的工作原理是： 对电容器进行充电后， 释放脉冲到细胞上维持所需的时 间，在进行第二次脉冲前需要对电容器进行重新充电。 那么脉冲间的间隔就取决 于电容器充电需要的时间和具体的电压， 也就是说在设置脉冲间的时间时， 其值 不能小于电容器充电所需的时间。 采用低压回路时，那么就需要采用 CE 模块，该模块的设置是可调的，所以其脉 冲时间和脉冲间的间隔是可调的，比高压电路要灵活、方便很多 高电压回路 : 一次充电，一次脉冲。在下一次脉冲前，电容器需要重新充电 最多只能进行2次脉冲，脉冲时间为0.05 -5msec,脉冲间隔为5-3OSeC 低电压回路 : 该电路是可调的，因此可一次充电，进行多次的脉冲 最多可进行10次脉冲，脉冲时间为0.05-100msec脉冲间隔为0.1 - 10 SeC 二使用方法： 系统部件： PC模块 CE模块 主机 ShOCkPOd电击槽 主界面 HoME EXPonen tial protocol Time Con Sta nt protocol Square WaVe protocol Pre-Set protocols 5. USer protocols HOME V 6. LaSt pulse OPtimiZe Data man ageme nt MeaSUreme nts USer Prefere nces EXP Onen tial protocol 在该选项下，用户可设置指数波的脉冲条件 程序显示： PROToCoL DETAlL Z EKPoNE IlTlAL XXXX XXXX XXXX XXXX VOIt a g e H c i