土壤中分解尿素细菌的分离与计数知识清单.docVIP

第 2 课 土壤中分解尿素细菌的分离与计数 知识清单 一、研究思路 1．筛选菌株 (1)  实验室中微生物筛选的原理 人为提供有利于 生物生长。 (2) 选择培养基  ________________ 生长的条件  ( 包括营养、温度、  pH 等 ) ，同时  ________或 ________其他微 在微生物学中，将允许 __________ 种类的微生物生长，同时 ________ 或 ________其他种类微生物生长的培 养基，称做选择培养基。 (3)  分离分解尿素的细菌的选择培养基 ①在该培养基配方中，为微生物的生长提供碳源的是 是凝固剂。 ②该培养基对微生物具有选择作用。其选择机制是 生长。  ____________ ，提供氮源的是 ________，琼脂的作用 ________________________________ 才能在该培养基上 ③土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们体内能合成 ________，将尿素分解的反应式是 ________________________________________________________ 。 Taq 细菌能忍受 93℃左右的高温，是在美国黄石国家公园的一个热泉中发现的，这说明，在寻找目的菌株时，要根据 ____________________________________________ 。 2．统计菌落数目的方法 稀释涂布平板法 ( 也叫活菌计数法 ) ①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的 ____________， 通过统计平板上的 ________，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 ______________是成功地统计菌落数 目的关键。 ②操作 第一，设置 __________ 组，增强实验的说服力与准确性。 将待测样品经一系列 10 倍稀释，然后选择 ________ 稀释度的菌液， 分别取 mL 接种到已制备好的平板上，然后用无菌涂布器将菌液涂布整个平板表面，放在适宜的温度下培养并计算菌落数。为使结果接近真实值，可将同一稀释度涂布到三个或三个以上的平板上， 培养并计算出 __________ 。 第二，为了保证结果准确，一般选择菌落数在 ________的平板进行计数，若设置的重复组中结果相差太远， 意味着操作有误，需重新实验。 ③计算公式：每克样品中的菌株数＝×M，其中 C 代表___________________________ ，V 代表 ________________________________(mL) ， M代表 ____________ 。 设置重复和对照 ①设置重复：培养过程中应设置重复组，同一稀释度下应涂布 ________个平板，才能增强实验的说服力与 准确性。 ②设置对照：实验中应设置对照，主要目的是排除 ________________________ 对实验结果的影响，提高实 验结果的可信度。如 __________ 对照组，观察培养物中是否有杂菌污染；设置 ________培养基，观察选择 培养基是否具有 ________作用。 二、实验设计 实验步骤 1．土壤取样： 从肥沃、湿润的土壤中， 用无菌小铁铲铲去表层土 3 cm左右，迅速取土壤并装入 ____________ 密封或事先准备好的 ________中。 2．制备培养基：①制备 ________________ 培养基作为对照组，尿素为唯一氮源的培养基作为 ________，用 来判断选择培养基是否具有 ____________。 ②放宽稀释范围， 如稀释倍数为 103～ 107 范围内的要分别涂布， 而每个稀释度下需要 ______个选择培养基、 ________个牛肉膏蛋白胨培养基，因此需要 15 个选择培养基和 5 个牛肉膏蛋白胨培养基。 ③两种培养基应各有一个作为 ________对照，此外还需准备 8 个灭菌的试管和 1 个灭菌的移液管。 3．样品的稀释与涂布平板：参考下面的实验流程示意图，将 10 g 土样加入盛有 90 mL 无菌生理盐水的锥 形瓶中 ( 锥形瓶体积为 250 mL) ，充分摇匀，吸取上清液 1 mL，转移至盛有 ________ mL 生理盐水的无菌大 试管依次等比稀释至 107 稀释度，并按照由 107～103 稀释度的顺序分别吸取 ______mL进行平板涂布操作。 按照浓度从 _____到 ______的顺序涂布平板，不必更换移液管。 说明：图中的 1、2、3 平板是 ____________ ，4 为 ____________________ 作对照，判断选择培养基是否具筛 选作用，还有两个空白对照，即不涂布稀释后菌液的选择培养