CMpl基因对骨骼代谢的影响及其机制.PDFVIP

　ｈｔｔｐ：／／ａａｍｍｔ．ｔｍｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ　　 　　　　　　第三军医大学学报，２０１７，３９（２３） ２２６３ ＤＯＩ：１０．１６０１６／ｊ．１０００５４０４．２０１７０８０８５ ＣＭｐｌ基因对骨骼代谢的影响及其机制 １，２ ３ １ １ １ １ 汤　勇 ，费丹莹 ，陈　芳 ，胡梦佳 ，李凤菊 ，王军平 　　（４０００３８重庆，第三军医大学军事预防医学院全军 １ ２ ３ 复合伤研究所，创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室 ；３１３０００浙江 湖州，解放军第九八医院：骨科 ，神经外科 ） 　　［摘要］　目的　观察ＣＭｐｌ对骨骼代谢平衡的影响，并对其机制进行初步研究。方法　以６月龄 －／－ 野生型（ＷＴ）小鼠和ＣＭｐｌ敲除小鼠（ＣＭｐｌ ）作为研究对象。采用ＭｉｃｒｏＣＴ扫描，进行股骨远端骨 小梁参数分析，包括骨密度（ＢＭＤ）、骨体积与组织体积比（ＢＶ／ＴＶ）、骨小梁厚度（Ｔｂ．Ｔｈ）、骨小梁数目 （Ｔｂ．Ｎ）、骨小梁分离度（Ｔｂ．Ｓｐ）和结构模型指数（ＳＭＩ）。通过三点弯曲试验记录股骨生物力学强度， ＶｏｎＫｏｓｓａ及茜素红矿化染色观察骨矿化水平，微板法检测血清钙、磷水平变化。ＴＲＡＰ染色观察破骨 细胞数量，体外流式细胞仪检测破骨细胞凋亡。流式细胞仪检测破骨细胞的 ＲＯＳ含量，ｑＰＣＲ和 Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析ｐ３８、ｐｐ３８、ＦｏｘＯ１和Ｎｒｆ２表达变化。结果　ＭｉｃｒｏＣＴ扫描结果提示，与ＷＴ小鼠比 －／－ 较，ＣＭｐｌ 小鼠股骨干骺端松质骨明显增多，ＢＭＤ、ＢＶ／ＴＶ、Ｔｂ．Ｎ显著升高，而Ｔｂ．Ｓｐ和ＳＭＩ明显降 低，差异均有统计学意义（Ｐ＜００５）；Ｔｂ．Ｔｈ两组差异无统计学意义。生物力学分析结果显示， －／－ －／－ ＣＭｐｌ 小鼠断裂负荷和刚度明显低于ＷＴ小鼠（Ｐ＜００５）。ＣＭｐｌ 小鼠股骨ＶｏｎＫｏｓｓａ染色和成 骨细胞茜素红染色均弱于ＷＴ小鼠，且血清中钙、磷含量亦明显低于ＷＴ小鼠（Ｐ＜００５）。ＴＲＡＰ染色 －／－ 结果显示，与ＷＴ小鼠相比较，ＣＭｐｌ 小鼠破骨细胞数量显著减少（８．６６７±１．２０２ｖｓ１８．０００±１７３２， －／－ Ｐ＜００５）。流式细胞仪检测发现，ＣＭｐｌ 小鼠破骨细胞凋亡率较 ＷＴ小鼠明显增加［（１４．５４± －／－ １１７）％ｖｓ（５．３８±０．５６）％，Ｐ＜００５］，且ＣＭｐｌ 小鼠破骨细胞的ＲＯＳ水平明显低于ＷＴ小鼠破骨 －／－ 细胞（６８３３．０±１７６．４ｖｓ１２９３３．０±２０２．８，Ｐ＜００５）。ｑＰＣＲ结果显示 ＣＭｐｌ 小鼠破骨细胞中 －／－ ＦｏｘＯ１和Ｎｒｆ２表达水平较ＷＴ小鼠破骨细胞明显降低（Ｐ＜００５），Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果也证实ＣＭｐｌ 小 鼠破骨细胞中ｐｐ３８、ＦｏｘＯ１和Ｎｒｆ２表达均显著下降（Ｐ＜００５）。结论　ＣＭｐｌ基因对骨骼代谢存在一 －／－ 定影响，ＣＭｐｌ敲除显著加速小鼠体内破骨细胞的凋亡，抑制破骨细胞生成，最终可能导致 ＣＭｐ