小鼠脾脏细胞悬浮液的制备整理.docxVIP

精品 小鼠脾脏细胞悬浮液的制备 取已经免疫的小鼠，剪尾取血，并分离血清供作为阳性对照。 小鼠颈椎脱臼处死， 75%乙醇浸泡 5 分钟，取出小鼠置于无菌操作台上，左 腹侧朝上； 在小鼠左腹侧中部剪开小口，撕开皮肤，暴露腹壁，可见红色长条状脾脏； 在脾脏下侧提起腹膜，剪开后上翻，暴露脾脏，用镊子提起脾脏，眼科剪分 离脾脏下面的结缔组织，取出脾脏；放入盛有 5ml 不完全培养液的培养皿 中冲洗，剥去其周围的结缔组织。 A 、梳刮法：脾脏可用镊子轻轻梳刮，避免将脾脏弄成碎片，将细胞悬液吸 入离心管 中，自然沉降 5 分钟，将悬液移至另一 离心管 中，弃去较大的组织块， 离心沉淀细胞； B、 钢网研磨法：将脾脏放置不锈钢网（100或200目）上，用注射器针芯 轻轻研压脾脏，获细胞悬液； C、 酶消化法：将脾脏用镊子夹碎，加入 400 u/ml胶原酶（III型）5ml/只 脾脏， 37 度消化 20 分钟，用尼龙网过滤，得到单细胞悬液。 注：1?一般6-8周龄小鼠，根据品系不同，可得 5-20 X107细胞/只小鼠； 2.手术器械灭菌：术前高压灭菌外，也可将手术器械泡在 95% 酒精的小容 器中，使用前取出器械，在酒精灯上烧灼去除酒精，即可保证无菌，此法较为简 便。 精品 感谢下载! 欢迎您的下载，资料仅供参考