酶制剂生产技术 第五节 细胞培养产酶 细胞培养产酶.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 细胞计数操作步骤 1、将血球计数板及盖片擦试干净，并将盖片盖在计数板上。2、将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间。3、静置3分钟。4、镜下观察，计算计数板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按下式计算：细胞数/ml＝4大格细胞总数/ 4×10000注意：镜下偶见由两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团占10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液。 细胞活力测定步骤 1、将细胞悬液以0.5ml加入试管中。2、加入0.5ml 0.4%台盼兰染液，染色2一3分钟。3、吸取少许悬液涂于载玻片上，加上盖片。4、镜下取几个任意视野分别计死细胞和活细胞数，计细胞活力。死细胞能被台盼兰染上色，镜下可见深兰色的细胞，活细胞不被染色，镜下呈无色透明状。活力测定可以和细胞计数合起来进行，但要考虑到染液对原细胞悬液的加倍稀释作用。 在人工条件下（设定pH、温度、溶氧等），在细胞生物反应器（bioreactor）中高密度大量培养动物细胞用于生产生物制品的技术。 目前可大规模培养的动物细胞有鸡胚、猪肾、猴肾、地鼠肾等多种原代细胞及人二倍体细胞、cho（中华仓鼠卵巢）细胞、BHK-21(仓鼠肾细胞)、Vero细胞(非洲绿猴肾传代细胞，贴壁依赖)等。 动物细胞大规模培养： 动物细胞生物反应器的类型及 其基本结构 1、搅拌式生物反应器 2、气升式生物反应器 3、中空纤维式生物反应器 4、透析袋或膜式生物反应器 5、固定床或流化床式生物反应器 机械搅拌式生物反应器 1、搅拌式生物反应器 气升式生物反应器 与搅拌式生物反应器相比，剪切力小，混合均一，氧和营养的传递好，由于没有了机械搅拌的结构，利于设备的密封，降低了造价。高径比一般在10：1左右。 2、气升式生物反应器 中空纤维反应器 3、中空纤维式生物反应器 由数百乃至数千根中空纤维集束组成的反应器，纤维的材料为聚砜或丙烯共聚物，纤维壁厚为50-100?m，呈多孔性，内层为超滤膜，内腔直径为200?m，两端用环氧树脂等材料将纤维粘和在一起，并使内腔开口于外加的塑料圆筒，使形成两个隔开的腔。 ①不能重复使用；②不能耐受高压灭菌，需用环氧乙烷或其它消毒剂灭菌；③难以取样检测。 膜式生物反应器 在动物细胞培养过程中，会产生一些代谢产物，如乳酸和氨等，对细胞的生长和产物的产生会产生抑制作用，因此有些学者设计了透析袋或膜式反应器，它们可将这些有害代谢产物透析或过滤掉，从而使细胞生长至更高密度，同时可根据需要选用不同相对分子质量的膜，使产物保留在膜内或与细胞分离开。 4、透析袋或膜式生物反应器 结构较简单，装填的材料可以是一切对细胞无毒、又有利于细胞贴附的材料，有实心载体和有孔载体两类。 5、固定床或流化床式生物反应器 动物细胞生物反应器的检测控制系统 1、培养过程需检测的物化参数 直接在线检出 取样离线检测 检测后计算 2、主要参数的检测和控制方法 ①温度 ②pH a在培养初期，偏碱，控制进二氧化碳量 b当细胞密度提高后控制NaHCO3的量 ③溶氧 ④搅拌 ⑤进出液流量 课堂总结 动物细胞发酵培养 植物细胞发酵培养 动植物细胞的特点 思考： 2、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？ 1、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基有何独特之处？ 3、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？ 4、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？ 主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。独特之处有：1、液体培养基 2、成分中有动物血清等 因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛，分裂能力强 成块组织不利培养，分散了做成细胞悬浮液利于培养 不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体 作 业 简述动物细胞发酵产酶的特点及其工艺条件的控制 * * * * * * * * * * * * * * * * 酶制剂生产技术模块二 酶的发酵生产 生物化工学院 兰欣 引入-动植物细胞大规模培养的意义 概念：动植物细胞培养是指动植物细胞在体外条件下的存活或生长，此时细胞不再形成组织。 （组织培养：组织或细胞在体外培养使之生存和生长，并保持组织分化、组织结构和功能。） 意义：虽然微生物的培养已经用来生产大量的对人类有益的产品，但是动植物细胞的大规模培养可以获得一些微生物培养所不能得到的重要的酶制剂产品。 特点：1、对环境条件要求高，对环境变化反应十分敏