高效液相色谱法分类与应用.ppt

HPLC中的速率理论 传质阻抗 固定相传质阻抗CS可以忽略 ，因df极小 流动相传质阻抗Cm 要求： dp小，Dm大 静态流动相传质阻抗 ： 由于部分流动相在固定相微孔内的滞留 静态流动相传质阻抗系数Csm Csm ∝dp2， Csm ∝1/Dm，而Dm∝T/η 要求: 固定相dp2、 流动相η都小 HPLC中的速率理论 H=A+Cmu+Csmu 原因：化学键合相，液体流动相 结果：HPLC的实验条件应该是：①小粒度、均匀的球形化学键合相；②低粘度流动相，流速不宜过快；③柱温适当。 HPLC中的速率理论 （二）正相键合相色谱法的分离条件 固定相 极性键合相　如氰基、氨基键合相等 流动相 烷烃加适量极性调节剂 （三）反相键合相色谱法的分离条件 固定相　非极性键合相如ODS 流动相　以水为基础溶剂，加入甲醇、乙腈等极性调节剂 弱酸、弱碱或缓冲盐作为离子抑制剂 加入0.1%∽1%的醋酸盐、磷酸盐可减少残余硅醇基的作用 （四）反相离子对色谱法的分离条件 固定相 尽可能选择表面覆盖度高且疏水性强的非极性键合相， 离子对试剂 离子对试剂所带的电荷应与试样离子的电荷相反 流动相pH　使试样组分与离子对试剂全部离子化 有机溶剂及其浓度 同一般HPLC 第三节　高效液相色谱仪 组成 输液系统 进样系统 色谱柱系统 检测系统 数据记录处理系统 一、输液系统 高压输液泵 恒流泵：在输送流动相过程中流量恒定。常用柱塞往复泵 双泵：为了克服流量的脉动。 有串联式和并联式 输液系统 输液泵应具备的性能： 流量精度高且稳定 流量范围宽 能在高压下连续工作 液缸容积小 密封性能好，耐腐蚀 输液系统 输液泵操作注意事项： 防止固体微粒进入泵体 流动相不应含有腐蚀性物质 防止溶剂瓶内的流动相被用完 不超过规定的最高压力 流动相一般应该先脱气 二、分离和进样系统 进样器 进样阀（六通阀）、自动进样装置 色谱柱（column） 由柱管和固定相组成 分析柱、制备柱 性能评价 H、n、fs、k和α的重复性，或R。 三、检测系统 （一）检测器(detector)的主要性能 要求： 灵敏度（sensitivity）高（检测限低） 噪音（noise）低 线性范围（linear range）宽 重复性（repeatability）好 适用范围广（通用型、专属型） （二）紫外检测器(ultraviolet detector) 检测原理： 朗伯－比尔 (Lambert-Beer) 定律，响应信号（吸光度）与浓度成正比A=εCl 特点： 灵敏度较高（10-6—10-9 g/ml），噪音低，线性范围宽，稳定性好，适于梯度，不破坏样品，应用广（分析、制备）。 局限： 只能检测有紫外吸收的物质，流动相的截止波长应小于检测波长。 专属型、浓度型检测器 紫外检测器 固定波长检测器 ：254nm 可变波长检测器： 光源：氘灯（和钨灯）， 200—400（800）nm，单色器，流通池（试样），光电管 光路系统和紫外分光光度计相似 光电二极管阵列检测器 (photodiode array detector； PDAD)： 一系列光电二极管，一个二极管对应接受光谱上约1nm谱带宽的单色光 紫外检测器 光电二极管阵列检测器 工作原理：复光通过流通池，再进入单色器，分光后照射在二极管阵列装置上，同时获得各波长的信号强度，即获得组分的吸收光谱。获得三维光谱－色谱图。 用途：吸收光谱用于组分的定性，色谱峰面积用于定量,判断峰纯度。 紫外检测器 （三）荧光检测器(fluorescence detector；FD) 检测原理： 化合物受紫外光激发后，发射出比激发光波长更长的光，称为荧光； 荧光强度 (F) 与激发光强度 (I0) 及荧光物质浓度 (C) 之间的关系为： F=2.3QKI0εCl Q为量子产率，K为荧光效率，ε为摩尔吸光系数，l为光径长度。 F=KC 荧光检测器(fluorescence detector；FD) 特点： 选择性好，专属型检测器 灵敏度比紫外检测器高（检测限10-10 g/ml） 激发波长(?ex)和发射波长(?em)的选择 第四节 高效液相色谱分析方法 定性分析方法 定量分析方法： 外标法、内标法 同GC（自己看） 高效液相色谱法分类和应用 经典液相色谱法为基础， 引入气相色谱法的理论和实验技术， 高压输送流动相， 高效固定相及高灵敏度检测器， 现代液相色谱分析方法。 与经典液相色谱法相比  颗粒极细（一般为10?m以下）、规则均匀的固定相，(键合相)传质阻抗小，