高效液相色谱基础的知识总结.pptVIP

高效液相色谱基础知识总结 一致程度。 在HPLC分析中，如果只用对照品（或样品）溶液重复进样测定精密度，这只表示色谱系统的精密度。而方法的精密度的验证应该对均一的真实（QC）样品进行包括样品处理在内的全过程操作,用接近最低、中间和最高浓度的三个样品浓度进行随机分析。日间精密度还应该连续测定8天，每个样品每天至少测定2次。 高效液相色谱基础知识总结 4.检测限和定量限 在样品中能检测出的被测组分的最低浓度（量）称为检测限（limit of detection,LOD），对其测定的准确度和精密度没有确定的要求。 能以适当准确度和精密度定量测定的样品中组分的最低浓度（量）称为定量限（limit of quantitation,LOQ）。这对低含量的组分的测定如杂质含量的定量测定和体内代谢物的测定十分重要。在定量分析中，定量限比检测限更重要。 高效液相色谱基础知识总结 二、定性分析方法 定性分析及鉴别试验可以分为色谱鉴别法和非色谱鉴别法，后者又可分为化学鉴别法和光谱鉴别法。 1.色谱鉴别法 色谱鉴别法是利用色谱定性参数保留时间（或保留体积）对组分进行定性分析，其原理是同一物质在相同色谱条件下保留时间相同。此法只适用于已知范围的未知物，如合成药物的前体或药物的可能代谢产物等。 高效液相色谱基础知识总结 常常采用已知物对照法，即往样品中加入某一纯物质（对照品），混匀进样。对比加入前后的色谱图，若加入后某峰相对增高，则该组分与对照品为同一物质。 2.化学鉴别法 化学鉴别法是利用专属性化学反应对分离后收集的组分进行定性分析。此法只能鉴别组分属于哪一类化合物。通常是收集色谱馏分，再与官能团分类试剂反应。有关官能团鉴别试剂可查阅有关文献。 高效液相色谱基础知识总结 3.光谱鉴别法 3.1. 两谱联用法：当相邻组分的分离度足够大时，以制备HPLC获得纯组分，而后用红外光谱、质谱或核磁共振等分析手段进行定性鉴别。 3.2. 两谱联用仪：将高效液相色谱仪与光谱仪用界面连成一个整体仪器，实现在线检测，称为两谱联用仪。两谱联用仪能同时给出样品的色谱图和每个组分的光谱图，获得定性、定量分析信息。因此，高效液相色谱-光谱联用仪是当今最重要的分析鉴别方法。 高效液相色谱基础知识总结 三、定量分析方法 HPLC定量分析的参数是色谱峰高和峰面积，定量依据是样品中组分的量（或浓度）与峰高或峰面积成正比。常用的定量方法有外标法、内标法。 1.外标法 用与待测组分同质的标准品作对照品，以对照品的量对比求算试样含量的方法称为外标法。外标法分为外标工作曲线法、外标一点法和外标两点法等。只要待测组分出峰、无干扰、保留时间适宜，即可用外标法进行定 高效液相色谱基础知识总结 量分析。但要求进样量必须准确，否则定量误差大。 2.内标法 选择适宜的物质作内标物，以待测组分和内标物的峰高比或峰面积比求算试样含量的方法称为内标法。内标法的关键是选择合适的内标物。内标物应该是样品中不含有的物质，纯度要高，与待测组分有相似的理化性质，保留时间与待测组分相近，与样品中各组分能完全分离且不与样品反应。 也分为工作曲线法、内标一点法（内标对比法）。 高效液相色谱基础知识总结 高效液相色谱基础知识总结 高效液相色谱基础知识总结 高效液相色谱基础知识总结 一、简介 色谱学是现代分离分析的一个重要领域，也是一门新兴学科，在化学、生物学等领域发挥着越来越重要的地位。近几十年来，色谱学各分支，如气相色谱、液相色谱、薄层色谱等研究方法都得到了深入的研究，20世纪50年代创立了气相色谱法，它的出现把色谱法从分离技术提高到分离与“在线”分析的新水平，为色谱法成为现代分离-分析方法奠定了基础，1957年诞生了毛细管色谱法。20世纪60年代推出了色谱-质谱联用技术 高效液相色谱基础知识总结 （LC-MS），有效的弥补了色谱法定性分析特征性差的弱点，成为最重要的分离分析方法之一， LC-MS在选择性、灵敏度、分子量测定和提供结构信息方面具有明显的优势，能够同时获得可靠的定性定量结果，因而被广泛应用于药物的质量控制（杂质、副产物、降解产物等的鉴定和测定）、药物在生物体内的吸收、分布和代谢研究（包括代谢物的结构确定及定量）和临床医学研究（如蛋白异常的研究）。 LC-MS已成为新药研究必不可少的手段。20世纪70年代，高效液相色谱法崛起克服了 高效液相色谱基础知识总结 气相色谱法不能直接用于分析难挥发、热不稳定及高分子化合物等的弱点，大大扩大了色谱法的应用范围，把色谱法推进到一个新水平。 高效液相色谱（high p