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威洛阳仲芜字陀 LUOYANG NORMAL UNIVERSITY 2015年植物组织培养课程论文 小麦组织培养的研究进展 院（系）名称 生命科学学院 专业名称 生物技术 学生姓名 杨佳霖 学 号 131344050 指导教师 于相丽 完成时间 2015年12月24日 小麦组织培养的研究进展 杨佳霖 (生命科学学院 生物技术专业 学号：131344050) 摘 要：小麦是世界上种植面积和产量均居榜首的重要粮食作物。综合世界粮农组织 (FAo)的统计报告？ 1, 1999年，世界小麦种植面积达2. 14亿hm2是人类蛋白质的主 要摄入来源。实践证明，利用植物基因工程改良小麦品质是一行之有效的途径 [2 . 3]。 虽然转化方法较多且日趋成熟，但限制其发展的一个重要因素是小麦的植株再生频率 低，而且建立稳定的小麦再生体系也比较困难。所以，在小麦组织培养过程中，建立高 频率的植株再生体系是小麦转化成功的重要基础和保证， 笔者就不同来源和不同生理状 态的小麦外植体通过不同组培体系而最终获得再生植株的进展作一简要概述。 关键词：小麦；组织培养；研究 1外植体来源 目前研究报道的小麦外植体源有幼胚、幼穗、成熟胚、幼叶、根、种子、花药、胚 轴和胚芽鞘等。张根发曾经提出，脱分化能力与再分化过程具有一致性，认为外植体的 类型对小麦体细胞组织再生能力影响很大。 1.1幼胚与幼穗 幼胚是目前公认最好的小麦外植体源，其愈伤组织的诱导和植株再生能力最高。但 小麦幼胚的培养再生过程往往表现出明显的基因型差异， 不同的小麦基因型可以在致密 愈伤组织的诱导、分化及分化能力的保持等方面表现出较大差异。此外，选择适宜的幼 胚取材时期对获得相对较好的培养效果是十分重要的。相比较而言，幼穗虽然比幼胚愈 伤组织出现晚，生长慢，植株再生绿苗率低，但在众多外植体中，幼穗也不失为一种具 有较高再生率的好材料。但不足之处是幼胚和幼穗作为外植体源受到季节的限制，在小 麦生育期中适合取材的时间很短，且很难保证其生育期的一致性，另外，材料的播种亦 受季节的限制。为了找到既适合于培养乂易获得的外植体，人们进行了大量研究，发现 小麦成熟胚可以有效克服幼胚与幼穗的上述不足。 1.2成熟胚 实践证明，用小麦成熟胚作为外植体，可以保证不同的个体问生理状况相似，而且 取材方便，不受季节限制，代价小，可大量获得。因此，已得到广泛的研究应用。但其 愈伤组织的形成及植株再生能力远远不及幼胚和幼穗，而且还存在有不少弊端。另外， 采用切去胚芽和调整激素的办法能够有效抑制愈伤组织的发芽。 实验初步证明了用成熟 胚作为外植体进行组织培养进而获得转基因小麦的可行性。以上研究表明，利用小麦成 熟胚诱导、分化再生植株的方法还有待继续探索，以期为小麦育种寻求较好的转基因受 体并建立成熟胚的小麦再生体系，进而为小麦新品种的选育奠定基础。 1.3幼叶 目前研究表明，很多禾谷类植物的叶片在离体条件下培养能够诱导出愈伤组织，如 燕麦、黑麦、大麦等。但再诱导出苗比较困难，即使有少量苗出现，也缺乏规律性，以 小麦为实验材料的研究也证明了这一点。鉴于小麦幼苗极易用成熟种子发芽获得，乂不 受生长季节的限制，因此，用小麦幼叶作外植体诱导出具有再生能力的愈伤组织，进而 进行外源基因导入等其他离体遗传操作，在不易获得未成熟胚的季节和实验条件下，也 不失为一种可选用的方法 1.4花药 有研究表明，小麦花药愈伤组织的再生能力很强，经基因枪轰击后比较容易获得转 基因植株，因而也是小麦转基因的良好受体。但花药培养在基因型问的差异非常明显， 故筛选出适合花药培养的优良基因型的研究还有待进一步深入。韩玉琴曾报道，小麦花 药愈伤组织产生的时期对其分化的影响很大。前期产生的愈伤组织分化率较高，随着花 药培养时间的延长，其愈伤组织的分化能力逐渐减弱，而白苗率却相对较高。这可能与 花药在含2, 4一 D的培养基上时间过长有关，其作用机理还有待进一步探讨。 2组织体系的建立 2.1材料的处理 据文献报道，组织培养中不同小麦外植体的处理方法不尽相同。下面简要介绍一下 在实验基础上总结出的较好的材料处理方法。 幼胚：取开花后14?20 d的小麦幼穗，剥出种子，70%乙醇消蠹1 min,无菌水 洗涤1次，再用0. 1%HgC12?肖蠹5 rain，无菌水洗3?5次，无菌条件下用镶子和解 剖针将幼胚取出，盾片向下接种。 幼穗：剥出幼穗外层叶鞘，截取最后一节6?7 cm,端口封Parafilrn , 0. 1% HgC12 消蠹4?7 rain ,无菌水洗3?5次，在无菌条件下将幼穗剥离出，切成1?2 mM勺穗段， 接种。 成熟胚：小麦成熟种子经70%乙醇浸泡5 rain，无菌水冲洗5次，浸种12h； 70% 乙醇浸泡1 rain , 0. 1% HgC1狠泡20