酶提取方式与纯化要求.pptVIP

酶的提取方式和纯化要求; 1 酶液获得 2 沉淀、萃取方法 3 柱层析分离法 4 电泳;防止酶的变性失活 低温 合适的pH 避免激烈搅拌，减少泡沫 去除重金属、微生物、蛋白酶等 ;一、酶液的制备;2、微生物胞外酶的酶液制备流程;3、细胞破壁的方法：;4、发酵液的预处理 ;5、固液分离 过滤 离心 沉降 膜过滤;6，酶液浓缩 酶液浓缩的作用 减少盐析剂、有机溶剂用量 减少压滤后的废水量，从而减轻其对周围环境的污染 酶液浓缩的方法 真空浓缩（刮板薄膜蒸发器、降膜式蒸发器、升膜式蒸发器） 冰冻浓缩 超滤浓缩;盐析沉淀 有机溶剂沉淀 等电点沉淀 复合沉淀 双水相萃取 反相胶团萃取;1，盐析;■ 提高盐浓度会增加蛋白质的溶解度：;分子在其等电点时，容易互相吸引，聚合成沉淀；加入盐离子会破坏这些吸引力，使分子散开，溶入水中。;蛋白质分子表面的疏水性区域，都聚集许多水分子，当盐类加入时，这些水分子被抽出，以便盐离子进行水合，暴露出来的疏水性区域相互结合，形成沉淀。;机 理 破坏酶蛋白质分子表面水膜 中和酶蛋白质分子表面电荷;盐析法的优点 成本低，不需要什么特别昂贵的设备。 操作简单，安全。 对许多生物活性物质具有稳定作用。 盐析法的缺点 沉淀物中含有大量的盐析剂;盐析用中性盐的选择;常用的中性盐中最重要的是(NH4)2SO4，因为它与其他常用盐类相比有十分突出的优点： 1) 溶解度