环境微生物监测标准操作规程.docx

环境微生物监测标准操作规程 一、监测指征 ．感染暴发或感染流行时，环境因素在感染传播中有流行病学意义。 ．监测潜在的危险环境状况，证明有危险的病原体存在或证明危险的病原体已被成功清除。 ．当某项感染控制措施改变时，评估其效果；或者根据规范要求，仪器设备或 系统启用时监测。 ．目标性监测的需要。 ．循证医学证据支持。二、空气监测 ( 沉降法 ) ( 一 ) 采样时间：消毒处理后与进行医疗活动之前。 ( 二 ) 采样高度：距地面垂直高度 80 ～ 150 cm 。 ( 三 ) 采样点设置 1 ．非洁净房间：室内面积≤ 30 ㎡，在对角线上设里、中、外 3 点。里、外两 点位置各距墙 1 m；室内面积 30 ㎡，设东、西、南、北、中 5 点。其中东、西、南、 北 4 点均距墙 1 m 。 9 cm 直径普通营养琼脂平板在采样点暴露 5 min 后送检培养。 ．洁净房间：清洁房间在空态或静态条件下，根据房间的不同清洁级别进行布 点，操作按照 GB 50333 — 2002 。 9cm 直径普通营养琼脂平板在采样点暴露 30 min 后送检培养。 ( 四 ) 采样注意事项 ．采样人员做好手部卫生，佩戴口罩、帽子等个人防护装备。进入清洁房间采样须穿洁服。 ．皿盖打开顺序应先内后外；手臂及头不可越过培养皿上方；行走及放置动作要轻，尽量减少对空气流动状态的影响；皿盖应扣放，以防污染。 3．采样结束后，由外向内合上皿盖。 4 ．采样完毕的培养皿应在 6 h 内培养。 ( 五 ) 实验室检验 1 ．培养皿在 37℃培养 48 h 后，进行菌落计数和致病菌检验。普通营养琼脂培 养基的配制按照 GB／ T 4789 ． 28— 2003 ；菌落计数方法按照 GB\T 7918 ． 2 — 1987 ； 致病菌检验：溶血性链球菌检验按照 GB／ T 4789 ． 11— 2003 ，沙门菌检验按照 CB\T 4789 ． 4 — 2003 ，铜绿假单胞菌检验按照 GB／ T7918 ． 4— 1987 ，金黄色葡萄球菌检验 按照 CB\T 7918 ． 5— 1987, ， 2．计算结果：非洁净房间以 100 c ㎡的平皿在空气中暴露 5 min 即相当于 10 L 空气中的细菌数，计算公式为： 3 ÷ (A ／ 100× t × 10 ／ 5) × N=50 000N ／ At 细菌数 (cfu ／ m )=1 000 式中： t ——平皿暴露于空气中的时间 (min) ； N—一培养后平皿上的菌落数 (cfu ／平 皿 ) ； A——所用平皿的面积 (c ㎡ ) 。 洁净房间直接以“个／ (30 min · Φ 90) ”平皿为单位计算结果。 ( 六 ) 结果判断： 参照 GB 15982 — 1995 《医院消毒卫生标准》。 三、物体表面监测 ( 一 ) 采样时间： 消毒处理后 4 h 内。 ( 二 ) 采样方法 被采样本面积 100 c ㎡取全部表面；如采样面积≥ 100 c ㎡，连续采样 4 个位置 ( 不可有重叠 ) ，每个位置采 5 cm × 5 cm 的大小，用浸有无菌生理盐水的棉拭子 1 支， 在规格板内横竖往返均匀涂擦各 5 次，并随之转动棉拭子，剪去手接触部位后，将棉 拭子投入 10 ml 无菌生理盐水试管内。不规则的物体表面，用棉拭子直接涂擦，采样 面积≥ 30 c ㎡ ( 三 ) 采样注意事项 1 ．送检时间不得超过 6 h ，若样品保存于 4 ℃，则不得超过 24 h 。 2 ．消毒后采样一定要采用中和剂，不同消毒剂所用中和剂不同，可参考 2002 版 《消毒技术规范》。 ( 四 ) 实验室检验 ．取 1 m1 倾注培养，平行双份。37℃培养 48 h ，进行菌落计数和致病菌检验。 普通营养琼脂培养基的配制按照 GB／ T 4789 ． 28— 2003 ；菌落计数方法按照 (3B ／ T 7918 ． 2 — 1987 ；致病菌检验与空气监测相同。 2 ．计算公式： 细菌总数 (cfu ／ c ㎡ )=( 平板菌落数×稀释倍数 ) ／采样面积 (c ㎡。) ( 五 ) 结果判断： 参照 GB 15982 — 1995 《医院消毒卫生标准》。