3-2 微生物学第三模块实验二 大肠杆菌和沙门氏菌的血清学检验.pptVIP

实验十 水中菌落总数和大肠菌群数量测定（二） 四、多管发酵法来测定水样中的大肠菌群 实验包括三个部分： 乳糖蛋白胨液体培养基初发酵， 伊红美兰培养基(EMB)平板分离， 乳糖蛋白胨液体培养基复发酵。 伊红美蓝培养基（1000mL）： 蛋白胨 10g，乳糖 10g，磷酸氢二钾 2g，琼脂 20~30g，2%伊红水溶液 20mL，0.5%美蓝水溶液 13mL。 四、多管发酵法来测定水样中的大肠菌群 2、伊红美兰培养基(EMB)平板分离： 将初发酵管培养物划线接种于伊红美兰平板上（分区划线法），37℃培养18-24小时，观察结果。 大肠菌群能够分解乳糖产生大量的有机酸，在低pH值条件下，两种染料结合生成沉淀，可起产酸指示剂的作用。 阳性结果的标准： 1.深紫黑色、有金属光泽； 2.紫黑色、不带或略带金属光泽； 3.淡紫红色，中心颜色较深。 四、多管发酵法来测定水样中的大肠菌群 3、乳糖蛋白胨液体培养基复发酵： 从伊红美蓝平板上将革兰氏阴性无芽孢的菌落接种于乳糖蛋白胨液体培养基中，37度培养24小时，观察结果。 阳性结果的标准：发酵液变为黄色、杜氏小管内有气泡。 4、革兰氏染色观察： 将阳性结果的菌落取部分涂片，进行革兰氏染色，观察结果。 阳性结果的标准：革兰氏阴性，且无芽孢。 实验结果 1、拍照记录伊红美兰培养基(EMB)平板分离的结果； 2、拍照记录革兰氏染色的结果； 3、拍照记录乳糖蛋白胨液体培养基复发酵的结果。 实验十二 大肠杆菌和沙门氏菌的血清学检验 实验目的 1.了解细胞凝集实验的原理； 2.学习并掌握大肠菌群血清学检验的方法。 实验原理 抗体和抗血清： 抗体(antibody)指机体的免疫系统在抗原刺激下，由B淋巴细胞或记忆细胞增殖分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。抗血清(antiserum)是一种含有多克隆抗体的血清。 实验原理 凝集反应： 颗粒性抗原(如细菌、细胞等)与相应抗体结合，在一定条件下可形成凝集团块的现象。 在细菌总菌落数计数和大肠菌群计数基础上，运用血清学检验，能更好地将样品中的细菌进行鉴定。 实验步骤 一、菌悬液的制备 用无菌枪头从伊红美兰平板上挑取1个带金属光泽的典型阳性菌落，在100微升生理盐水的小管中打散均匀，标记为菌1。同样方法，挑选一个阴性菌落制备悬浊液，标记为菌2。 二、抗原性检测 在两块干净载玻片分别做上标记，并分别滴加取大肠杆菌抗血清和沙门氏菌抗血清三滴，各20uL。然后，分别加入大肠杆菌、生理盐水、待测菌悬液各20uL。将玻片放置于空培养皿中，于37℃保温10-20分钟，检查是否有颗粒状沉淀，并对照阳性、阴性组，判断分析待测菌的种类。 1、革兰氏（Gram）染色法染色 1. 涂片：在一片载玻片上依次涂金黄色葡萄球菌、待测菌和大肠杆菌，并固定。 2. 初染：在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液，染1分钟，倾去染液，流水冲洗至无紫色。 3. 媒染：先用新配的路哥氏碘液冲去残水，而后用其覆盖涂面1分钟，后水洗。 4. 脱色：除去残水后，滴加95%酒精进行脱色约15-20秒，后立即用流水冲洗。 5. 复染：滴加番红染色液，染3-5分钟，水洗后用吸水纸吸干。 6. 镜检：观察染色结果并拍照。 四、实验步骤 实验结果 1、拍照记录抗原性检测结果； 2、根据本模块实验结果，以老师提供的《水质微生物学检验报告》为模板，完成检验报告，并提交。 微生物实验课到此全部结束 谢谢大家参与！ 祝大家期末考试顺利 身体健康 学业有成 * * *