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原核表达步骤 Chi l 原核表达基本试验步骤 将克隆化基因插入合适载体后导入大肠杆菌用于表达大量蛋白质的 方法一般称为原核表达。这种方法在蛋白纯化、定位及功能分析等方面 都有应用。大肠杆菌用于表达重组蛋白有以下特点：易于生长和控制； 用于细菌培养的材料不及哺乳动物细胞系统的材料昂贵；有各种各样的 大肠杆菌菌株及与之匹配的具各种特性的质粒可供选择。但是，在 大肠 杆菌中表达的蛋白由于缺少修饰和糖基化、磷酸化等翻译后加工 ，常形 成包涵体而影响表达蛋白的生物学活性及构象。 表达载体在基因工程中具有十分重要的作用，原核表达载体通常为质 粒，典型的表达载体应具有以下几种元件： （1）选择标志的编码序列； （2 ）可控转录的启动子； （3 ）转录调控序列 ( 转录终止子，核糖体结合位点 ) ； （4 ）一个多限制酶切位点接头； （5 ）宿主体内自主复制的序列。 原核表达一般程序如下：获得目的基因－准备表达载体－将目的基 因插入表达载体中（测序验证）－转化表达宿主菌－诱导靶蛋白的表达 －表达蛋白的分析－扩