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工业生产中噬菌体的检测及防治 2010.1.28 噬菌体简介 噬菌体是感染细菌、真菌、放线菌或螺旋体等微生物的病毒的总称，因部分能引起宿主菌的裂解，故称为噬菌体。。噬菌体分布极广，凡是有细菌的场所，就可能有相应噬菌体的存在。在人和动物的排泄物或污染的井水、河水中，常含有肠道菌的噬菌体。在土壤中，可找到土壤细菌的噬菌体。噬菌体有严格的宿主特异性，一旦离开了宿主细胞，噬菌体既不能生长，也不能复制。 实验室空气中噬菌体检测 检测方法 1 双层琼脂平板法 首先倒入下层琼脂培养基（2%，约10mL/皿）待用。融化上层培养基（1%），冷却至50℃左右时，每管中加入敏感指示菌 (枯草芽孢杆菌) 菌液0.2mL混合后立即倒入上述平板铺平。在待检测角落空气中暴露几分钟，转入恒温培养箱， 30℃恒温培养6～12h观察结果。如有噬菌体，则在双层培养基的上层出现透亮无菌圆形空斑──噬菌斑。 2 单层琼脂平板法 省略下层培养基，将上层培养基的琼脂量增加至2%，融化后冷却至45℃左右，如同上法加入指示菌，混合后迅速倒平板。在空气中暴漏几分钟，30℃恒温培养6～16h后观察结果。 方法1优点是能确切定量，方法2简便省料。 噬菌体侵染形成的噬菌斑 水中噬菌体的检测 水中噬菌体的检测? 取0.5mL生产指示菌液及待测水样0.2mL混匀，然后立即倒入已凝固的双层平板上层。放在28~30℃培养24小时，观察有无噬菌斑。 （双层培养基方法同空气检测） 生产中噬菌体快速检测 1离心分离加热法（快速检查） 取生产中正常培养液和怀疑侵染有噬菌体的异常菌培养液，4000rpm离心20min，分别取两组发酵液的上清液(A1)，一部分于分光光度计上测定OD650光密度值，另外各取5mL上清液于试管中，置水浴中煮沸2min（A2），检测A2溶液OD650光密度值，记录结果，比较光密度的差异。 2 载玻片法快速检测 将怀疑噬菌体污染的菌悬液与0.5-0.8%琼脂培养基混合，在无菌载玻片上凝固，经过培养2.5-4个小时，在显微镜下计数噬菌斑。 噬菌体的防治 1 生产车间的消毒 （1）发酵罐排气和泡沫要通过药剂容器后外放 （2）管道阀门死角要彻底灭菌 （3）定期冲刷地面 （4）菌种室减少与外界接触，操作人员严格执行无菌操作 噬菌体的防治 2 选育抗噬菌体菌株 使用抗噬菌体菌株，替代敏感菌株，这是发酵工业克服噬菌体危害的最有效措施。 3 发酵过程中检测 种子罐发酵后期立即采用载玻片快速检测法进行噬菌体检测 4 发生污染后的挽救措施 早期发现后要立即停止搅拌，立即进行连续消毒，然后补料重新接种，后期发现可进行药剂防治，如草酸钠，柠檬酸钠等。 * * 噬菌斑