特异性沉默Eca109细胞系stathmin基因siRNA表达载体的构建.docxVIP

特异性沉默Eca109细胞系stathmin 基因siRNA表达载体的构建 【摘要】目的构建并筛选特异性沉默 stathmin基因的pSUPER S逆转录病毒载体 以及稳定表达的细胞克隆。方法用DN曜组 技术，将64nt能转录产生靶向 stathmin小 发夹RNA勺寡核昔酸序列，定向克隆入逆转 录病毒载体pSUPER EGFP,应用脂质体将重 组逆转录病毒载体pSUPER S转染细胞系 Eca109, G418筛选建立稳定产生逆转录病毒 的细胞克隆，RT PCR检测转染细胞 stathmin mRNA的表达。结果重组逆转录病 毒载体经EcoRI、Hind山双酶切，可见4692 nt和285 nt条带；测序结果表明插入序列 正确；重组载体转染 Eca109细胞，可表达 绿色荧光蛋白，经G418筛选得到抗性细胞 克隆，转染细胞 stathmin mRNA勺表达较对 照组明显减弱。结论特异性沉默 stathmin 基因的pSUPER S逆转录病毒载体以及稳定 表达的细胞系构建和筛选成功。 【关键词】 小干扰RNA stathmin基因； pSUPER EGFP 载体；Eca109 细胞 Abstract : Objective To construct and identify a recombinant retroviral vecto r pSUPER S that target