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- 2020-11-14 发布于北京
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采用培养平板计数法要求操作熟练 准确,否则难以得到正确的结果: 样品充分混匀; 每支移液管及涂布棒只能接触一个 稀释度的菌液; 同一稀释度三个以上重复,取平均值; 每个平板上的菌落数目合适,便于 准确计数; 一个菌落可能是多个细胞一起形成,所以在科研中一般用 菌落形成单位(colony forming units, CFU)来表示,而 不是直接表示为细胞数。 情境:微生物生长量的测定 任务:微生物生长繁殖的测定 知识点:微生物生长繁殖的测定 课程:微生物检验技术 微生物生长繁殖的测定 一、微生物生长 生物个体物质有规律地、不可逆增加,导 致个体体积扩大的生物学过程。 生长: 生物个体生长到一定阶段,通过特定方式 产生新的生命个体,即引起生命个体数量 增加的生物学过程。 繁殖: 生长是一个逐步发生的量变过程, 繁殖是一个产生新的生命个体的质变过程。 一个微生物细胞 合适的外界条件,吸收营养物质,进行代谢。 如果同化作用的速度超过了异化作用 个体的生长 原生质的总量(重量、体积、大小)就不断增加 如果各细胞组分是按恰当的比例增长时,则达到一定程度后就会发生繁殖,引起个体数目的增加。 群体内个体的进一步生长 群体的生长 群体生长 = 个体生长 + 个体繁殖 个体生长 → 个体繁殖 → 群体生长 二、微生物生长繁殖测定 单位时间里微生物数量或生物量的变化 微生物生长: 微生物生长的测定: 个体计数 群体重量测定 群体生理指标测定 1、重量法 以干重直接衡量微生物群体的生物量; 通过样品中蛋白质、核酸含量的测定间接推算 微生物群体的生物量; 测定多细胞及丝状真菌生长情况的有效方法 (一)测生长量 2、比浊法 在一定波长下,测定菌悬液的光密度,以光密度(O.D.)表示菌量。 实验测量时应控制在菌浓度与光密度成正比的线性范围内,否则不准确。 采用细菌计数板或血球计数板,在显微镜下对微生物数量进行直接计数(计算一定容积里样品中微生物的数量)。 缺点: 不能区分死菌与活菌; 不适于对运动细菌的计数; 需要相对高的细菌浓度; 个体小的细菌在显微镜下难以观察。 1、显微镜直接计数法 血球计数板构造 (二)计繁殖数 通常用来测定细菌、酵母菌等单细胞微生物的生长情况或样品中所含微生物个体的数量(细菌、孢子、酵母菌) 2、稀释平板菌落计数法 稀释平板菌落计数法测定原理是每个活细菌在适宜的培养基和良好的生长条件下可以通过生长形成菌落。
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