细菌基因组DNA提取试剂盒离心柱型.docxVIP

细菌基因组DNA提取试剂盒(离心柱型) GK4003-10 GK4003-20 GK4003-50 GK4003-100 .试剂盒组成 Components GK4003-10 10 Preps GK4003-20 20 Preps GK4003-50 50 Preps GK4003-100 100 Preps GenClean Column 10 20 50 100 2.0-ml Collection Tube 10 20 50 100 Lysis Solution 4 ml 10 ml 25 ml 50 ml AW1 Solution (a) 6 ml 12 ml 30 ml 60 ml AW2 Solution (b) 3 ml 8 ml 20 ml 40 ml AE Buffer(c) 3 ml 8 ml 20 ml 40 ml TE(pH8.0) 2 ml 4 ml 10 ml 20 ml Boiled RNase A 50 0 240 U 480 h 120 U Proteinase K(d) 30 0 250 U 500 h 1000 0 Lysozyme(f) 5 mg 15 mg 30 mg 60 mg SP Buffer 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml protocol 1 1 1 1 (a)首次使用前，必须在 AW1溶液瓶中按表示量加入无水乙醇，充分混匀后使用。每次使用后将瓶盖盖 紧，以保持中的 AW1乙醇含量。如果您发现 AW1由于运输或保管不当造成容量严重不准，请用量筒定 容后再加入0.6倍体积的无水乙醇。 (b)首次使用前，必须在 AW2瓶中加入4倍体积的无水乙醇，充分混匀后使用。每次使用后将瓶盖盖紧， 以保持AW舛的乙醇含量。如果您发现 AW2由于运输或保管不当造成容量严重不准，请用量筒定容后 再加入4倍体积的无水乙醇。 AE Buffer 为 10 mM Tris-HCl, 0.5 mM EDTA pH 8.5 。 TE(pH 8.0)或者水(pH7.0)均可以使用，但 是DNA勺洗脱效率通常要低 20%右。 收到后分装-20C冻存。不得将 Proteinase K直接加到Lysis Solution中，以免酶失活。 Lysozyme使用前加入按5 mg溶于100 pl计算，溶于SP Buffer,溶解后，分装于-20 C冻存。 客户自备：PBS缓冲液，胰蛋白酶，无水乙醇 运输储存温度 运输室温 储存 Proteinase K , Lysozyme , Boiled RNase A : -20 c 其他室温 .主要用途 从细菌和各种培养细胞中小规模抽提基因组 DNA .主要特点 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，重复性好。 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 快速，简捷，单个样品操作一般可在 50分钟内完成。 多次柱漂洗确保提取细菌基因组的高纯度， OD260/280nm典型的比值达1.7?1.9,长度可达50?100kb,可 直接用于PCR, Southern-blot和各种酶切反应。 培养细胞与细菌样品准备 培养细胞的准备 对于悬浮培养细胞：1,000g室温离心5分钟，彻底去除上清。 对于单层培养细胞：吸去培养基,用 PBS洗涤细胞，然后用胰蛋白酶消化细胞。当细胞从培养瓶表面 脱落以后，将细胞转移到离心管中, 1,000g室温离心5分钟，彻底去上清。 将离心去上清的细胞用 200 pl TE(pH8.0)悬浮。 处理细胞可达1X106?5X107个，增加处理细胞数量，请相应增加处理时间。 细菌样品的准备 8 (1)将适量的指数生长期细菌(最多可达 5X10细国，约0.5 ml过伐培养国披)，8,000rpm,离心1分钟, 彻底弃净培养基。 ⑵加入200 pl TE(pH8.0)悬浮细菌，按照下表中的要求加入 Lysozyme溶液，用吸头混匀，对于革兰氏阳性 和革兰氏阴性菌酶解时间的要求是不一样的，详见下表。 革兰氏阴、阳性菌所用溶菌酶浓度与酶解时间表 溶菌酶终浓度 力口入Lysozyme体积 室温下酶解时间 革兰氏阴性菌 400 gg/ml 1 pl或不加 3?5分钟 革兰氏阳性菌 3mg/ml ~8 mI /200 mI 悬液 5?10分钟 操作步骤 在按准备方法制备的 200 pl TE悬浮样品中，加入 4 pl RNase A混匀，再加入 4 ] Proteinase K ,加入 200 mI Lysis Solution 70 C 保温 10 分钟。 注意：(1)应按次序加入，不得将 Proteinase K先加入Lysis Solution再加到样品中。 冷却到室温，加入 200微升无水乙醇，混匀