食品微生物技术 微生物基础知识 项目十 食物中毒及其控制技术.pptVIP

3、五项生化试验 H2S、靛基质 、 pH7.2尿素酶、KCN 、 赖氨酸脱羧酶 三糖铁培养的培养 典型沙门氏菌在三糖铁培养上的特征： 表面（-）粉红色、底层（+）黄色、 H2S （+）底层有黑色、有动力。 在TSI培养基中：表面（+）黄色、 H2S （-）的培养物可排除，其它培养物均有可能是沙门氏菌。 尿素酶试验 右为阳性（红） 左为阴性对照（黄） 赖氨酸脱羧酶试验 从左往右依次为 对照、阳性（紫）、阴性（黄） 靛基质试验 右为阳性（液面红） 左为阴性对照（液面黄） ONPG试验 左为阳性（黄） 右为空白对照 肠杆菌科各属生化反应初步鉴别表 反应序号A1,典型反应判定为沙门氏菌属。如尿素、氰化钾和赖氨酸三项中有一项异常，按下表可判定为沙门氏菌。如有两项异常，则按A3判定为弗劳地氏柠檬酸杆菌。 反应序号A2：补做甘露醇和山梨醇试验，按下表判定结果 反应序号B1:补做ONPG－ONPG+为大肠埃希氏菌，ONPG－为沙门氏菌。同时，沙门氏菌应为赖氨酸+，但甲型副伤寒沙门氏菌为赖氨酸-。 4、血清学分型鉴定 有条件的学校可进行血清学分型鉴定。 5、菌型的判定结果报告，根据生化试验和血清学分型鉴定结果。 四、实验结果 报告检验结果 金黄色葡萄球菌检验 一、实验目的 1.了解金黄色葡萄球菌检验原理 2.熟悉金黄色葡萄球菌检验方法 二、实验原理 金黄色葡萄球菌的典型形态呈球形，直径0.4～1.2μm，大小不一，平均直径约为0.8μm。 革兰氏染色阳性，呈葡萄串状排列。无鞭毛、无芽胞。在陈旧培养物中，衰老的菌体常转为革兰氏阴性。 易培养，对营养要求不高，在普通培养基中生长良好。 需氧或兼性厌氧。 最适生长温度37℃，最适生长pH 7.4。耐盐性强，在含10～15%的氯化钠培养基中仍能生长，可用于筛选菌种。 在普通营养琼脂平板上培养18～24ｈ，可形成圆形、表面光滑、不透明的菌落。可产生金黄色色素，色素为脂溶性，不溶于水，故色素只局限于菌落内，不渗至培养中。 在血平板上可形成明显透明的溶血环。为β型溶血。 可产生卵磷脂，在卵黄高盐培养基上形成周围有白色沉淀环的菌落。 大多数菌株分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，产酸不产气。甲基红试验、 VP试验多为阳性，不产生靛基质。触酶阳性。 培养特性： 金黄色葡萄球菌的检测程序 检样25g(mL) ＋225mL生理盐水或磷酸盐缓冲液 7.5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤 36±1℃ Baird-Parker平板，血平板 涂片染色 观察溶血 血浆凝固酶试验 报告 血平板18~24h， Baird-Parker平板18~24h或45~48h。 BHI肉汤和营养琼脂小斜面 36±1℃ 18~24h 三、实验方法 1.增菌培养基 7.5%氯化钠肉汤：为葡萄球菌选择性增菌培养基，因金黄色葡萄球有耐受高盐的特性，因而能在此增菌液中生长，除某些嗜高盐的海洋菌外，大多数细菌都被增菌液中的高盐所抑制。 胰酪胨大豆肉汤：含氯化钠达10%，以胰酪胨替代牛肉浸粉，并加入少量磷酸氢二钾和葡萄糖促进葡萄球菌的生长。 2.样品的稀释 固体和半固体样品：称取25g样品至盛有225 mL磷酸盐缓冲稀释液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min～10000 r/min均质1min～2min，或放入盛有225 mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min，制成1:10的样品匀液。 液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品至盛有225mL磷酸盐缓冲稀释液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。 3.增菌与分离培养 增菌培养：吸取5mL上述样品匀液，接种于50mL 7.5%氯化钠肉汤或10%胰酪胨大豆肉汤培养基内，36℃±1℃培养18h～24h。金黄色葡萄球菌在7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生长，污染严重时在10%胰酪胨大豆肉汤内呈混浊生长。 将上述培养物，分别划线接种到Baird-Parker平板和血平板，血平板36℃±1℃培养18h～24h。Baird-Parker平板36℃±1℃培养18h～24h或45h～48h。 4.分离培养基 Baird-Parker琼脂：培养基中含有卵黄亚碲酸钾，能抑制大多数细菌的繁殖，并能促进金黄色葡萄球菌的生长使其产生黑色和晕圈。培养基中的丙酮酸钠和甘氨酸也能促进金黄色葡萄球菌的生长。 金黄色葡萄球菌的菌落形态：圆形、光滑凸起、湿润，直径约2~3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落似有奶油树胶的硬度，偶而可见无混浊带和透明圈的非典型菌落。 长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。 5.分离培养基 血琼