2.2动物细胞培养与细胞核移植(1).ppt

* . . . * . . . * . . . * . . . * . . . 专题2 细胞工程 2.2.1 动物细胞培养和核移植技术 动物细胞培养 动物细胞融合 单克隆抗体技术 动物细胞核移植 动物细胞工程常用技术 其它动物细胞工程的基础 问题讨论: 烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植，但对于大面积烧伤病人来讲，健康皮肤很有限，请同学们想一想如何来治疗该病人？ 取该患者的皮肤进行细胞培养,获得足量的细胞后再移植 一、动物细胞培养的应用和概念： 1、概念： 2、原理： ★ 细胞增殖 动物细胞培养就是从动物有机体中取出 相关的组织,将它分散成单个细胞,然后, 放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和 增殖。 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬液 10代细胞 传代培养 无限传代 单个细胞 加培养液 原代培养 部分细胞遗传物质改变,获得不死性 剪碎、用胰蛋白酶处理（或胶原蛋白酶） 细胞贴壁，出现接触抑制 用胰蛋白酶处理 分瓶传代培养 50代细胞 3、过程 ★ 强调一：细胞贴壁过程 ■细胞贴壁：在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴附 在瓶壁上，称为细胞贴壁。 ■培养瓶或培养皿壁要求： 表面光滑、无毒、易于贴附。 贴壁细胞：这类细胞的生长必须有可以贴附的支持物表面,细胞依靠自身分泌的或培养基中提供的贴附因子才能在该表面上生长，繁殖。 ■当贴壁细胞分裂生长到 表面相互接触时，细胞 就会停止分裂增殖，这 称为细胞的接触抑制。 强调二：接触抑制 因此，瓶壁上的细胞层数是单层（或一层）！ 培养器皿 动物细胞培养瓶内表面为什么要光滑、无毒？ 易于培养细胞贴壁，进行生长增殖 1.选动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养 材料的原因？ 因为其细胞生命力旺盛，分裂能力强，分化程度低。 2.为何动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的呢？ 成块的组织细胞靠在一起,彼此限制了细胞的生长和增殖 3.如何将动物组织分散成单个的细胞呢？ 先用剪刀剪碎,后用蛋白酶处理 2.为何动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的呢？ 4、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是什么成份？ 胰蛋白酶水解蛋白质 细胞间的成份是蛋白质 常考问题汇总： 5.原代培养： 动物组织消化后的初次培养培养（分瓶之前） 贴满瓶壁的细胞要重新用胰蛋白酶处理，然后分瓶继续培养，这个过程称传代培养（分瓶培养的过程）。 6.传代培养： 7.细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停 滞，大部分细胞衰老死亡.少数细胞存活到50代,部分细胞细胞核型（遗传物质）发生变化，这种传代细胞为细胞株。 8.细胞系：50代以后大部分死亡，获得不死性，这些细胞已经发生了突变。朝着等同于癌细胞的方向发展，无限繁殖。 常考问题汇总： 9.目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常在10代以内 的原因？ 以保持正常二倍体核型（或10代以内的细胞遗传物质不改变） 常考问题汇总： 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬液 10代细胞 传代培养 无限传代 单个细胞 加培养液 原代培养 部分细胞遗传物质改变,获得不死性 剪碎、用胰蛋白酶处理（或胶原蛋白酶） 细胞贴壁，出现接触抑制 用胰蛋白酶处理 分瓶传代培养 50代细胞 3、过程 ★ 4.动物细胞培养的条件: （1）无菌无毒 的 环 境： 适宜的温度：人和哺乳动物细胞最适温度为36.5±0.5℃。 适宜的酸碱度（pH）：7.2-7.4 液体合成培养基：葡萄糖、氨基酸、 促生长因子、无机盐、微量元素）等； 通常还需加入血浆、血清等天然成分。 （4）气体环境： （2）营 养： （3）温度和pH： “95％空气+5％CO2”的混合气体培养箱 对培养液和所有培养用具无菌处理；培养液中添加抗生素防止培养过程中污染；定期更换培养液以清除代谢产物，防止对培养细胞造成危害。 （补充培养基中缺乏的成分） O2用于细胞呼吸； CO2维持培养液的pH。 获得细胞 植物细胞的全能性 细胞或细胞产品 新的个体或细胞产品 培养结果 或细胞产物 快速繁殖、培育无病毒植株等 培养目的 葡萄糖、动物血清、 促生长因子 蔗糖、植物激素 培养基特有成分 液体培养基 固体培养基 培养基性质 细胞增殖 原 理 动物细胞培养 植物组织培养 比较项目 植物细胞和动物细胞培养的比较 ★ ★ ★ 1、写出ab所代表细胞工程名称： a表示： . b表示: . 2、实施细胞工程时，所需受体细胞 大多采用卵母细胞的原因： 体积大，易