小鼠白介素1βIL1β酶联免疫分析ELISA.docxVIP

小鼠白介素 1β (IL-1β)酶联免疫分析 (ELISA) 试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用。 检测范围：  96T 2.5ng/L-80ng/L 使用目的： 本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中白介素 1β (IL-1β)含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠白介素 1β (IL-1β)水平。用纯化的小鼠白介 素 1β (IL -1β)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白介素  1β (IL- 1β)，再与 HRP 标记的白介素 1β (IL-1β)抗体结合，形成抗体 -抗原 -酶标抗体复合物，经 过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转 化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的白介素 1β (IL-1β)呈正相关。用酶标仪在 450nm 长下测定吸光度（ OD 值），通过标准曲线计算样品中小鼠白介素 1β (IL-1β)浓度。 试剂盒组成  波 1 2 3 4 5 6  30 倍浓缩洗涤液酶标试剂酶标包被板样品稀释液显色剂 A液显色剂 B液  20ml× 1 瓶 6ml × 1 瓶 12孔× 8条 6ml × 1 瓶 6ml × 1 瓶 6ml × 1/瓶  7 终止液 8 标准品（ 160ng/L ） 9 标准品稀释液 10 说明书 11 封板膜 12 密封袋  6ml ×1 瓶 0.5ml × 1 瓶 1.5ml × 1 瓶 1 份 2 张 1 个 标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验，可将标本放于 -20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含 NaN3的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（ HRP）活性。 操作步骤 标准品的稀释： 本试剂盒提供原倍标准品一支， 用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。 80ng/L 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入 150μl 标准品稀释液 40ng/L 4 号标准品 150μl 的 5 号标准品加入 150μl 标准品稀释液 20ng/L 3 号标准品 150μl 的 4 号标准品加入 150μl 标准品稀释液 10ng/L 2 号标准品 150μl 的 3 号标准品加入 150μl 标准品稀释液 5ng/L 1 号标准品 150μl 的 2 号标准品加入 150μl 标准品稀释液 2. 加样： 分别设空白孔 （空白对照孔不加样品及酶标试剂， 其余各步操作相同） 、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl， 然后再加待测样品 10μl（样品最终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽 量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。 4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用 5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此 重复 5 次，拍干。 加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。 温育：操作同 3。 洗涤：操作同 5。 显色：每孔先加入显色剂 A50 μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀， 37℃避光显色 15 分钟. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色） 。 11. 测定：以空白空调零， 450nm 波长依序测量各孔的吸光度（ 液后 15 分钟以内进行。 操作程序总结：  OD  值）。 测定应在加终止 计算 以标准物的浓度为横坐标， OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式， 将样品的 OD 值代入方程式， 计算出样品浓度， 再乘以稀释倍数， 即为样品的实际浓度。 注意事项 1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未 用完，板条应装入密封袋中保存。 2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值大于标准品孔第一孔的 OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（ n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（× n× 5）。 5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6．底物请避光保存。 7．严格按照说