液相液质检测前处理技术（刘永慧） 液相液质检测前处理技术（刘永慧） 液相色谱-质谱联用.ppt

* 质谱定义 宽泛应用 * 质谱定义 宽泛应用 * 质谱定义 宽泛应用 * 质谱定义 宽泛应用 * 质谱定义 宽泛应用 * 质谱定义 宽泛应用 * 质谱定义 宽泛应用 * 实 验 内 容 Experiment 邻苯二甲酸酯类 PAEs 环境内分泌干扰物 广泛存在 首批列入环保部门控制对象 * 三个标样的混合溶液 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 邻苯二甲酸二丁酯 DBP * Scan(+) 190-330m/z [M+H]+ [M+Na]+ * SIM（195.0 223.0 279.1） 子离子扫描 MRM 母离子扫描 实际样品 * 六 大 禁 止 禁止高浓度待测样品 1ppm 禁止用洗涤剂清洗玻璃容器 禁止用塑料容器装有机溶剂 禁止用不挥发性缓冲盐 禁止高浓度有机缓冲盐 10mM 禁止无机样品进样 七 、注意事项及建议 * 建 议 采用等度洗脱 采用甲醇作为流动相 比例偏大 采用小内径的色谱柱 如2.1mm 除MRM模式 不能超过4个通道 一个色谱峰的数据点在15-25个 * 建 议 ESI广泛适用 APCI效果更佳 正模式广泛适用 负模式本底更低，信噪比更高 * 质谱定义 宽泛应用 * 质谱定义 宽泛应用 * 质谱定义 宽泛应用 * 质谱定义 宽泛应用 * 质谱定义 宽泛应用 * 质谱定义 宽泛应用 * 质谱定义 宽泛应用 * 质谱定义 宽泛应用 * 质谱定义 宽泛应用 * 质谱定义 宽泛应用 * 质谱定义 宽泛应用 * 质谱定义 宽泛应用 * 质谱定义 宽泛应用 * 质谱定义 宽泛应用 * 质谱定义 宽泛应用 * 质谱定义 宽泛应用 * 质谱定义 宽泛应用 * 质谱定义 宽泛应用 * 质谱定义 宽泛应用 * 质谱定义 宽泛应用 * 质谱定义 宽泛应用 * 质谱定义 宽泛应用 * 质谱定义 宽泛应用 * 质谱定义 宽泛应用 * 质谱定义 宽泛应用 * 真空系统其他附件 真空规（真空计） 真 空 管 道 真 空 阀 门 吸 附 阱 抽 气 方 式 单泵抽气方式 双泵差动抽气方式 * 1. 样品的预处理： 从保护仪器角度出发，防止固体小颗粒堵塞进样管道和喷嘴，防止污染仪器，降低分析背景，排除对分析结果的干扰。 要求获得最佳的分析结果，从ESI电离的过程分析：ESI电荷是在液滴的表面，样品与杂质在液滴表面存在竞争，不挥发物（如磷酸盐等）防碍带电液滴表面挥发，大量杂质防碍带电样品离子进入气相状态，增加电荷中和的可能。 六、 LC-MS分离条件的选择和优化 分离条件选择 * 样品的预处理常用方法 a）超滤 b）溶剂萃取／去盐 c）固相萃取 d）灌注（Perfusion）净化／去盐 e）色谱分离 反相色谱分离 亲和技术分离 f）甲醇或乙腈沉淀蛋白 g）酸水解，酶解 h）衍生化 * 2. 电离源的选择 ESI适合于中等极性到强极性的化合物分子，特别是那些在溶液中能预先形成离子的化合物和可以获得多个质子的大分子（蛋白质）。只要有相对强的极性，ESI对小分子的分析常常可以得到满意的结果。 APCI不适合多电荷的大分子分析，它的优势在于非极性或中等极性的小分子的分析。 * ①电离方式 ESI采用离子蒸发方式使样品分子电离，而APCI电离是放电探针促使溶剂和其它反应物电离、碰撞及电荷转移等方式形成了反应气等离子区，样品分子通过等离子区时，发生了质子转移。 ②样品流速 APCI源允许的流量相对较大，0.2-2mL/min，而ESI源允许流量相对较小，最大只能为1.0mL/min。 ③断裂程度 APCI源的探头处于高温，可使热不稳定的化合物分解，产生碎片；ESI源探头处于常温，常生成分子离子峰，不易产生碎片。 ④灵敏度 都很高。ESI有利于分析生物大分子及其他分子量大的化合物，而APCI更适合于分析极性小的化合物。 ⑤多电荷 APCI源不能生成一系列多电荷离子，所以不适合分析生物大分子。而ESI源特别适合于蛋白质、多肽类的生物分子，由于它能产生一系列的多电荷离子。 * 3. 正负离子模式的选择 正离子模式适合于碱性样品，可用乙酸（pH＝3-4）或甲酸（pH＝2-3）对样品加以酸化。 负离子模式适合于酸性样品，可用氨水或三乙胺对样品进行碱化。 有些酸碱性并不明确的化合物，可优先选用APCI（+）进行测定。 * 4. 流动相的选择 常用的流动相为甲醇、乙腈、水和它们不同比例的混合物以及一些易挥发盐的缓冲液，如甲酸铵、乙酸铵等，还可以加入易挥发酸碱如甲酸、乙酸和氨水等调节pH值。 LC／MS接口避免进入不挥发的缓冲液，避免含磷和氯的缓冲液，含