微生物应用基础 浊度法 演示文稿-浊度法.pptVIP

微生物生长量的测定 -浊度法 一、直接法 （1）测体积 它是一种较为粗放的方法，通常用于初步比较用。例如将待测培养液放在刻度离心管中作自然沉降或进行一定时间的离心，然后观察沉降物的体积。 （2） 称干重 采用离心法或过滤法测定，一般干重为湿重的10%~20%。 通过生长量测定微生物生长 二、间接法 （1）生理指标法 ：与生长量相平行的生理指标很多，它们均可用作生长测定的相对值 1） 测定细胞总含氮量来确定细菌浓度 大多数细菌的含氮量为干重的12.5%，酵母菌为7.5%，霉菌为6.0%。总氮量与细胞粗蛋白的含量的关系可用（粗蛋白总量=含氮量%×6.25）含氮量的测定方法有很多，常用凯氏定氮法。 通过生长量测定微生物生长 2）含碳量的：将少量生物材料混入1ml水或无机缓冲液中，用2ml 2%重铬酸钾溶液在100℃下加热30分钟，冷却后，加水稀释至5ml，在580nm波长下测定光密度值（用试剂作空白对照，并用标准样品作标准曲线），即可推算出生长量。 3）其它 磷、DNA、RNA、ATP和 N–乙酰胞壁酸等的含量，以及产酸、产气、产CO2（用标记葡萄糖作基质）、耗氧、粘度和产热等指标，均可用于生长量的测定。 通过生长量测定微生物生长 （2）比浊法 微生物在液体培养基中生长，由于原生质含量的增加，引起培养物混浊度的增高。某一未知浓度的菌液在透射光下用肉眼与某一比浊管进行比较，如果两者的浊度相当，即可目测出该菌液的大致浓度。 精确的测定，要用分光光度计进行。在可见光的450~650nm波长内均可测定。 通过生长量测定微生物生长 一、直接法 直接法即是在显微镜下直接观察细胞并进行计数的方法，其计数结果是包括死细胞在内的总菌数。 （1）比例计数法 是一种粗放的计数方法。将已知颗粒（例如霉菌的孢子或红细胞等）浓度的液体与待测细胞浓度的菌液按一定比例均匀混合，然后镜检各自的数目，求出未知菌液中的细胞浓度。 通过计数测定微生物生长 （2）血球计数板法 计数一定容积中的细胞总数的常用方法，此法对细胞较大的酵母菌较为适用 通过计数测定微生物生长 二、间接法 是一种活菌计数法，其原理是活菌在液体培养基中生长繁殖使液体混浊，在固体培养基表面形成菌落，然后计数活菌的方法。 （1）平板菌落计数法 标准方法将待测样品稀释，然后取适宜的稀释度样品与固体培养基混匀，凝固后培养，然后计数平板上出现的菌落数乘以样品的稀释度，即可计算出样品的含菌数。 通过计数测定微生物生长 （2）液体稀释法 对未知样品作10倍系列稀释。选适宜的3个连续的10倍稀释液各取5ml，接种到3组共15支液体培养基试管中，每管接入1ml，培养一定的时间后，计录每个稀释度出现生长的试管数，然后查MPN表，根据样品的稀释倍数可计算出其中的活菌含量。 通过计数测定微生物生长 一、准备菌种： 将细菌接种到牛肉膏蛋白胨葡萄糖三角瓶培养基中，37℃振荡培养18h，另外准备单菌落平板1块 浊度法测定菌体量 二、分组 分为三个小组： 取1.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基, 37 ℃ 200rpm 取3.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基，37 ℃ 200rpm 取5.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基，37 ℃ 200rpm 每培养一小时取样一次(2.5h,3.5h加测1次). 对照组测量起始pH,所有瓶子测量发酵9h结束测pH. 浊度法测定菌体量 测量： 选用600nm波长，以蒸馏水作为参比，开始培养前测定每组培养液的OD值作为起始点。开始培养后，每小时吸取测定一次OD值。 浊度法测定菌体量 作图：以时间-菌体OD值做出生长曲线图 浊度法测定菌体量