毕赤酵母表达系统资料整理.docxVIP

Mut+和 Muts 毕赤酵母中有两个基因编码醇氧化酶 ——AOX1及 AOX2，细胞中大多数的醇氧化酶是 AOX1基因产物，甲醇可紧密调节、诱导 AOX1基因的高水平表达，较典型的是占可溶性蛋白的 30%以上。 AOX1基因调控分两步： 抑制 / 去抑制机制加诱导机制。简单来说，在含葡萄糖的培养基中，即使加入诱导物甲醇转录仍受抑制。为此，用甲醇进行优化诱导时，推荐在甘油培养 基中培养。注意即使在甘油中生长 (去抑制 )时，仍不足以使 AOX1基因达到最低水平的表达，诱导物甲醇是 AOX1基因可辨表达水平所必需的。 AOX1基因已被分离，含 AOX1启动子的质粒可用来促进编码外源蛋白的目的基因的表达。 AOX2基因与 AOX1基因有 97%的同源性，但在甲醇中带 AOX2基因的菌株比带 AOX1基因菌株慢得多，通过这种甲醇利用缓慢表型可分离 Muts 菌株。在 YPD(酵母膏、蛋白胨、葡萄糖 )培养基中，不论是 Mut+ 还是 Muts 其在对数期增殖一倍的时间大约为 2h。Mut+ 和 Muts 菌株在没有甲醇存在的情况下生长速率 是一样的，存在甲醇的情况下， Mut+在对数期增殖一倍的时间大约为 4至6个 小时， Muts 在对数期增殖一倍的时间大约为 18 个小时。 菌株 GS 115、X- 33、KM71 和 SMD1168 的区别 GS 115、KM71 和 SM