日粮添加果胶对LPS应激仔猪肠道糖基化修饰的影响.pdfVIP

摘 要 断奶应激引起的仔猪肠道屏障损伤是造成仔猪生长缓慢、腹泻甚至死亡的重要原因。本文重 点探讨了日粮添加果胶（Pectin ，PEC ）对脂多糖（lipopolysaccharide ，LPS ）应激断奶仔猪生产性 能、肠道屏障功能及肠道糖基化修饰的影响，建立了研究肠道糖基化修饰的荧光凝集素免疫组化 法。试验选取36 头21 日龄、胎次一致、体重接近（6.77±0.92 ）kg 健康DLY 断奶仔猪，采用2×2 试验设计，即日粮（CON 或PEC ）和应激（LPS 或生理盐水对照）处理。试验第14 d 和第21 d ， 应激组仔猪腹腔注射LPS （80 μg/kg.BW ）。试验结束，每组选取8 头仔猪，屠宰采样，测定其生 产性能、肠道屏障功能和肠道糖基化修饰模式。结果如下： （1）日粮添加PEC 有效改善LPS 应激对仔猪生产性能的影响。LPS 应激显著降低21 d （n =8/组）仔猪BW 和ADG （P ＜0.05 ），显著影响仔猪F/G （P ＜0.05 ）；日粮添加PEC 显著提高14 d （n= 18/组）仔猪BW 和 1-14 d 仔猪ADG （P ＜0.05 ），极显著改善1~14 d （n=18/组）仔猪F/ G （P ＜0.01 ）。日粮添加PEC 显著缓解LPS 应激引起的21 d 仔猪（n=8 ）BW 、ADG 和ADFI 降 低（P ＜0.05 ）。 （2 ）日粮添加PEC 有效改善LPS 应激引起的仔猪肠道损伤，促进肠道健康 （n=8/组）。LPS 应激显著降低回肠的绒毛高度和绒隐比，下调回结肠MUC2 和TFF3 及回肠IL-10 表达 （P ＜0.0 5 ），显著上调回肠IL-1β、MCP-1 和TLR4 及结肠MCP-1 和TLR4 表达（P ＜0.05 ），显著升高血 浆LPS 含量和AKP 活力 （P ＜0.05 ）；日粮添加PEC 显著增加回肠绒毛高度和绒隐比，显著缓解 LPS 应激引起的回肠绒毛高度及绒隐比降低 （P ＜0.05 ），上调回肠MUC2 和TFF3 表达，下调T LR4、MCP-1 和IL-1β 表达，上调回结肠IL-10 表达，显著缓解LPS 应激引起回肠IL-1β、MCP- 1 和TLR4 及结肠MCP-1 表达上调 （P ＜0.05 ），降低血浆D 乳酸和AKP 含量 （P ＜0.01 ），显著 缓解LPS 诱导的血浆D-乳酸、DAO 和AKP 含量提高 （P ＜0.05 ）。 （3 ）建立研究肠道糖基化修饰的荧光凝集素免疫组化法。以FITC-Lectin 为探针，筛选出5 种凝集素（UEA-1、ConA、DBA 、PNA 、WGA ）的最佳封闭时间、组织通透最佳条件以及最佳 使用量。最佳条件：切片脱蜡后，封闭切片30 min ，采用5 μg/mL FITC-Lectin 室温孵育1 h， DAPI 封片剂封片。方法具有灵敏度高、特异性好、定量多元特点。 （4 ）日粮添加PEC 改变糖基化修饰模式。LPS 应激对仔猪回肠各种凝集素染色平均光密度 （Average Optical Density ，AOD ）未见显著影响，日粮添加PEC 有降低WGA 的AOD 趋势（P ＝0.08 ）。日粮添加PEC 促进回肠O-糖基化核心 （Core ）结构改变，抑制LPS 对O-糖基化Core 1 型和Core 2 型结构糖基转移酶作用。LPS 应激显著下调回肠糖基转移酶CIGALT1、CIGALT1 C1、GCNT3、B3GALT5 、FUT1 、FUT2、ST3GAL1、ST6GALNAC1 表达，上调GCNT1、B3GN T3、B3GNT6 表达（P ＜0.05 ）。日粮添加PEC 显著下调回肠C1GALT1、C1GALT1C1、GCNT1、 B3GNT3、GCNT3、B3GALT5、FUT1 、ST3GAL1、ST6GALNAC1、MGEA5 表达，上调B3GN T6、FUT2 表达（P ＜0.05 ）。日粮添加PEC 显著缓解LPS 应激引起回肠GCNT1、B3GNT3 表达 提高，下调GCNT3、B3GALT5、FUT1 、ST6GALNAC1 表达（P ＜0.05 ）。 结论：LPS 应激引起机体免疫功能下降、肠道损伤，影响生产性能。日粮添加PEC 一定程度 I