奶牛源益生性乳酸菌分离鉴定及其防治奶牛子宫内膜炎的应用研究.pdfVIP

摘 要 子宫内膜炎是奶牛产后常见多发病，临床上对该病的治疗以抗生素为主，随着抗生素的过 度使用，抗生素残留和病原菌耐药问题日益严重，因此非抗生素疗法成为研究的热点，乳酸菌 作为非抗生素疗法之一，引起了人们的重视。但是乳酸菌对该病的防治报道相对较少。因此， 本试验从产后40-60 d 健康奶牛子宫中分离乳酸菌，通过对乳酸菌的抑菌性、产酸性、产H O 2 2 性、黏附性、耐药性检测、耐药基因检测、安全性、临床治疗有效性等试验评价乳酸菌防治奶 牛子宫内膜炎的潜力。研究结果如下： 1. 乳酸菌的分离鉴定、抑菌试验和黏附试验。采用MRS 固体培养基筛选乳酸菌，革兰氏 染色，生化鉴定，和 16S rDNA 鉴定，共分离出 8 株乳酸菌，抑菌试验发现植物乳杆菌 （Lactobacillus plantarum ）、副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei ）以及鼠李糖杆菌 （Lactobacillus Rhamnosus ）抑菌活性较好。黏附试验发现副干酪乳杆菌黏附子宫内膜上皮细胞 能力较好。因此选择这3 株乳酸菌用于后续试验。 2. 乳酸菌益生性和安全性评价。对乳酸菌产酸、产H O 进行检测，发现3 株乳酸菌都具 2 2 有良好的产酸能力，3 株乳酸菌都不具备产H O 的能力。药敏试验发现，3 株乳酸菌均对常用 2 2 7 种抗生素敏感，且能显抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和无乳链球菌的生长。用PCR 法检测 了乳酸菌的部分耐药基因，结果检测出磺胺类耐药基因 sul-2 和 sul-3，氨基糖苷类耐药基因 aphA-1 和aphA-2 以及β- 内酰胺类抗生素耐药基因bla-IMP 。大鼠安全性试验结果显示0.1 mL 1×1010 CFU/mL 能够引起大鼠子宫轻微的炎症。结果表明，3 株乳酸菌不会对试验动物造成病 理损害，可用于临床试验。 3. 乳酸菌培养基优化以及活菌制剂的制备。为得到更高浓度的乳酸菌，以MRS 为基础培 养基通过改变培养基中主要碳源，氮源的浓度，优化乳酸菌培养基。结果显示：改良后的培养 基发酵副干酪乳杆菌结束后OD 值达由原来的1.250 增加到 1.331，鼠李糖杆菌发酵结束后OD 4 值由原来的1.314 增加到1.396，植物乳杆菌无明显变化。采用L9 （3 ）正交试验设计方法优化 冻干包埋剂的最佳浓度组合，植物乳杆菌，副干酪乳杆菌，鼠李糖杆菌按与冻干保护剂按 1:1 的比例在-40℃真空条件下冻干48 h 制成冻干保护剂。结果显示：植物乳杆菌冻干一个月后存 活率为92.5%，副干酪乳杆菌存活率为89.7%，鼠李糖乳杆菌存活率为93.3% 。 4. 乳酸菌治疗奶牛子宫内膜炎的临床试验。选择临床型子宫内膜炎患牛 20 头，随机分为 乳酸菌治疗组和对照组，每组10 头。用3 株乳酸菌活菌冻干剂及其发酵上清液联合治疗。结果 显示：治愈率为60%，有效率为90%。 关键词：奶牛，子宫内膜炎，乳酸菌，临床疗效 I Abstract Endometritis is common diseases in dairy cows during postparturition period, causing by bacterial infection uterine. It is mainly treated with antibiotics in clinical practice, which is likely to cause antibiotic