去泛素化酶USP11通过p21调控细胞周期介导非小细胞肺癌增殖的分子机制研究.pdfVIP

博士毕业论文 摘 要 USP11 是去泛素化酶中泛素特异性蛋白酶家族（ubiquitin-specific proteases, UPS ）成员之一。全长包含920 个氨基酸，N 端含有DUSP 结构域（domain present in ubiquitin specific proteases ，DUSP ）和UBL 结构域（ubiquitin-like domain ，UBL ）， C 末端为催化结构域，其中包括第二个UBL 结构域。在细胞内，USP11 通过去泛 素化作用稳定多种底物蛋白，如BRCA2 、ALK5 、IκBα 、PML 、γH2AX 、RanBPM 等，参与细胞信号转导调控，DNA 损伤修复，并影响细胞的增殖和侵袭转移。但 是，目前研究表明，USP11 在不同类型的肿瘤细胞中，发挥的功能不同。在神经 胶质瘤中，USP11 通过去泛素化并稳定PML ，抑制神经胶质瘤的增殖、迁移和侵 袭。在乳腺癌中，USP11 通过稳定 XIAP 而促进乳腺癌细胞的增殖。然而，至今 USP11 与非小细胞肺癌（NSCLC ）的关系仍然未阐明。 p21 是第一个被鉴定的细胞周期素依赖性激酶抑制因子（CKI ），属于CIP/KIP 家族成员，介导细胞周期停滞、DNA 复制与修复、增殖与分化、衰老与凋亡等重 要细胞生命活动的调控。p21 由CDKN1A 基因编码，蛋白全长 164 个氨基酸。p21 通过对 CDKs 活性的精确调节在确保细胞周期有序运行中发挥重要的作用，它的 表达受转录和转录后机制的严密调控。在转录水平，p21 通常以 p53 依赖和 p53 非依赖的方式被调控。在分裂细胞中，p21 是一种非常不稳定的蛋白，半衰期仅 有20-60 分钟，主要通过泛素-蛋白酶体通路降解。目前研究表明有三种E3 泛素 连接酶复合物包括SCFSKP2 、CRL4CDT2 和APC/CCDC20 参与细胞周期不同时相对p21 的降解。在G1/S 期，SCFSKP2 促进 Ser130 位点被 CDK2 磷酸化的p21 的泛素化 降解。在S 期，CRL4CDT2 特异性靶向与PCNA 结合的p21 ，导致p21 的泛素化降 解。在 G2/M 期，APC/CCDC20 识别与CDK1-cyclin A 和CDK1-cyclin B 结合的p21 并负责p21 泛素化降解。E3 泛素连接酶复合物中的 SKP2 、CDT2 和CDC20 蛋白 在功能上是作为底物识别亚单位，充当 p21 与 E3 泛素连接酶复合物其它部分的 连接桥梁。另一方面，研究也发现细胞内多个蛋白能通过不同的机制稳定 p21 ， 如p38 和 JNK 通过磷酸化 p21 促进 p21 稳定；WISp39 、hSSB1 和 TRIM39 经蛋 白相互作用稳定p21 ；Ras 通过促进p21-cyclin D1 复合物的形成稳定p21 ；Cabels1 通过干扰 PSMA3 与 p21 的结合而促进p21 稳定。但是这些蛋白都不具有任何去 泛素化酶的活性和功能，在细胞内是否存在去泛素化酶，能够直接逆转p21 泛素 化过程至今仍然不清楚。 本文通过质谱数据和数据库分析，发现USP11 和p21 可能存在相互作用。为 了进一步验证两者的相互关系，我们采用间接免疫荧光染色技术发现 USP11 与 p21 存在共定位，免疫共沉淀及体外蛋白直接孵育等实验发现USP11 免疫沉淀物 II 去泛素化酶USP11 通过p21 调控细胞周期介导非小细胞肺癌增殖的分子机制研究 中均可检测到p21 ，这些实验证明 USP11 与p21 存在直接相互作用。p21 是非常 不稳定的蛋白，能被不同的 E3 泛素连接酶泛素化，进而通过蛋白酶体降解。考 虑到 USP11 作为去泛素化酶的特征以及 USP11 与 p21