宿主因子KCNMA1影响流感病毒复制的机制研究.pdfVIP

摘 要 动物流感造成全球畜牧业的巨大经济损失，能够跨宿主屏障感染人类，引发严重的公共卫生 问题，造成该疾病的病原为流感病毒。流感病毒在进化过程中不断发生变异，其基因组突变和重 组会造成抗原漂移及抗原转变，获得感染更多新宿主的能力，持续产生出危害动物和人类健康的 新病毒。也正是该特点使得针对病毒研制的疫苗需要随着病毒的进化而更新，靶向作用于病毒蛋 白的药物逐渐产生耐药的问题。因此，完善病毒与宿主相互作用机制的研究对抗病毒显得尤为重 要。 本研究利用KCa1.1 的小分子拮抗剂Paxillines 与特异性 siRNA 干扰技术相结合的方法，在 A549 与 293T 细胞系上对宿主因子 KCNMA1 分别进行功能抑制和下调表达处理，从而探究 KCa1.1 对包括H 1、H5 、H7 和H9 亚型在内的六株流感病毒（WSN, GD1330, FJ1660, AH1，SD008- 627K 和SD007 ）复制情况的影响。结果表明，KCNMA1 所编码的KCa1.1 能够帮助流感病毒在 细胞上建立感染。为了探究宿主因子KCNMA1 影响流感病毒生命周期的具体阶段，运用 qPCR 与影像技术在 A549 细胞系上分别评估 H 1、H5 、H7 和 H9 亚型流感病毒内吞效率，结果表明 KCa1.1 能够帮助多种亚型流感病毒完成内化过程。 流感病毒HA 蛋白在病毒粒子内吞过程中发挥关键作用，为了进一步阐明KCa1.1 发挥作用 的机制及相关通路，本研究利用免疫沉淀（IP ）与shotgun 质谱结合的方法筛选得到了与H5、H7 亚型流感病毒HA 蛋白相互作用的宿主膜蛋白，并对筛选得到的蛋白质数据库进行了基因本体论 （GO ）分析。同时也鉴定出在病毒感染情况下与KCa1.1 存在相互作用的宿主膜蛋白，为进一步 揭示KCa1.1 帮助流感病毒完成内吞作用的机制提供了基础数据。 关于流感病毒早期入侵宿主细胞的相关研究尚不完善，本研究揭示了宿主蛋白 KCa1.1 能够 影响多种亚型流感病毒的内化过程，丰富了流感病毒与宿主相互作用的生命周期网络，证明宿主 因子KCNMA1 有潜力作为新的药物靶点。 关键词：流感病毒，KCa1.1，内化，蛋白质组学 I Abstract Animal influenza has caused great economic losses to the global livestock industry, it can infect humans across host barriers, which cause serious public health problems, and the pathogen of the disease is the influenza virus. Influenza viruses constantly mutate during evolution and their genomic mutations and recombinations will cause antigen drift and antigen transformation, which makes the virus gain the ability to infect more new hosts and continue to produce new viruses that endanger animal and human health. On the account of this feature, the vaccines developed against the virus need to be updated as the virus evolves, and drugs which target viral proteins gradually become resistant. Therefore, it is particularly important to explore the mechanism of the interaction between host and influenza virus during the period against the v