生物技术制药——第六章-酶工程制药教学文案.ppt

生物技术制药——第六章-酶工程制药;酶工程简介;酶的基础知识;;必需基团：这些基团若经化学修饰使其改变，则酶的活性丧失。;现代酶工程的主要内容;酶的来源;早期酶的生产多以动植物为主要原料;目前工业生产一般都以微生物为主要来源;酶的生产菌;生产菌的来源;目前常用的产酶微生物;;酶在医药领域的应用;;;;;抗炎净创类：目前在治疗上发展最快，用途最广的一种。 多数是蛋白质水解酶，分解发炎部位纤维蛋白的凝结物，消除伤口周围的坏疽、腐肉和碎屑。 其中有些酶能够分解脓液中的核蛋白使成简单的嘌呤和嘧啶，降低脓液的粘性、达到净洁创口、消除痴皮、排除脓液抗炎消肿的目的。 主要有胰蛋白酶、糜蛋白酶、双链酶，α-淀粉酶、胰脱氧核糖核酸酶等。 ;血凝和解凝类：这类酶都是从血液中提取出来的。 凝血酶的作用是促使血中纤维蛋白元变成不溶性纤维蛋白,从而促使血液凝固，防止微血管出血。 纤维蛋白溶解酶的作用是溶解血块，为目前临床上最新的一种酶制品,治疗血栓静脉炎、冠状动脉栓塞等。 抑肽酶作为肽酶抑制剂，广泛应用于体外循环手术，大剂量抑肽酶可明显减少心脏外科手术后的渗血，消除因心脏外科手术后渗血而导致的死亡 ;;;第二节 酶的分离纯化;一、酶的分离纯化技术路线;二、酶的提取;;（二）酶的抽提;(三）沉淀分离;三、酶的纯化;第三节 酶和细胞的固定化;酶应用过程中的一些不足;（一）固定化酶的制备;2、固定化酶的特点;固定化酶缺点;固定化酶简介;固定化酶简介;固定化酶简介;3、酶和细胞固定化方法; 酶和细胞固定化方法 载体结合法 交联法 包埋法 网格型 微囊型 物理吸附法 离子结合法 共价结合法 热处理（细胞） ;酶和细胞固定化模式;（1）载体结合法; B、离子结合法：酶通过离子键结合于具有离子交换基的水不溶性载体上。DEAE-纤维素等 优点：操作简单，处理条件温和，酶的高级结构和活性中心的氨基酸残基不易被破坏。 缺点：载体和酶的结合力弱，易受缓冲液种类或pH的???响，离子强度高时，酶易脱落。;;C、共价结合法：酶以共价键结合于载体上。即将酶分子上非活性部位功能团与载体表面反应基团进行共价结合的方法。 优点：酶与载体结合牢固，稳定性好，不易脱落。(目前研究最为活跃的一类酶固定化方法 ) 缺点：载体要活化，反应条件苛刻，操作复杂，反应条件剧烈，酶易失活和产生空间位阻效应,常常会引起酶蛋白高级结构发生变化，并导致活性中心受到破坏,难以得到比活高的固定化酶，甚至底物的专一性等性质也可能发生变化。;共价结合法 注意事项;（2）交联法;酶分子之间共价交联和与水不溶性载体共价结合 酶分子；（a）酶分子之间用双功能基团的化学交联试剂相互交联成水不溶性的固定化酶；（b）酶分子被偶联到水不溶性载体上形成水不溶性的固定化酶;;（3）包埋法;A、网格型：将酶或细胞包埋在高分子凝胶细微网格中。 常用合成高分子化合物有聚丙烯酰胺、聚乙烯醇、光敏树脂。天然高分子化合物有淀粉、明胶、胶原、海藻胶、角叉菜胶。多用于固定化细胞;B、微囊型：将酶或细胞包埋在高分子半透膜中。通常为直径几微米到几百微米的球状体。颗粒比网格型要小得多，比较有利于底物与产物的扩散，但反应条件要求高，制备成本也高。;（4） 选择性热变性法;4、酶和细胞的固定化载体;（二）新型的酶固定化方法;;（三）固定化细胞的方法;固定化细胞简介;固定化细胞简介;固定化细胞特点;;;固定化细胞的优点;固定化细胞的缺点;固定化细胞的制备技术;（1）载体结合法制备技术;（2）包埋法制备技术;（3）交联法制备技术：由于所用交联剂戊二醛等对细胞有毒性，一般很少用。 （4）无载体法制备技术：靠细胞自身的絮凝作用制备固定化细胞的技术。通过助凝剂或选择性热变性的方法实现细胞的固定化。可以获得高密度细胞，固定化条件温和，但是机械强度差。 此外还有粘合法，截留法等 ;（四）固定化方法与载体的选择依据;固定化方法的选择依据;载体的选择;（五）固定化酶（细胞）的性质与指标;（1）颗粒状：包括酶珠、酶块、酶片、酶粉。每种固定化方法均可制备颗粒状，方法简单，比表面积大，转化效率高，适用各种反应器。如酵母酶珠。 （2）纤维状：三醋酸纤维素用适当的溶剂溶解后与酶混合，再用喷丝的方法就可制成酶纤维。比表面积大，转化效率高，但只适用于填充床反应器。此外，纤维酶可以织成酶布用于填充床反应器。 ;;;;;;;;;固定化细胞的性