抗癌最新药物：紫杉醇.docVIP

【 摘　要 】 为了研究红豆杉细胞对紫杉醇(taxo1)防御反应的机制,以人工半合成的taxol类似物多烯紫杉醇(taxotere)代替taxol,建立了taxol诱导红豆杉细胞悬浮培养体系,结果表明taxol作为类诱导子激活了红豆杉细胞防御响应.通过研究不同浓度的DMSO和乙醇对东北红豆杉细胞代谢和细胞膜通透性的影响,发现一定剂量的DMSO和乙醇抑制了细胞的生长、降低了细胞活力、增大了细胞膜的通透性.在相同浓度的条件下,DMSO比乙醇对细胞的毒性小,低于1％(v/v)的添加量,DMSO不影响细胞代谢和膜的通透性,而只是短时改变了酶的活力,而同样浓度的乙醇则会严重干扰细胞的代谢,破坏细胞膜的完整性.系统研究了taxol和taxotere对不同生长时期红豆杉细胞代谢的影响.发现在对数前期加入taxol和taxotere,可显著抑制细胞的繁殖;而在对数生长后期加入taxol和taxotere,对细胞的增殖无显著影响,说明taxol及taxotere对不同生长时期红豆杉细胞的作用机制不同.系统研究了taxol和taxotere诱导红豆杉细胞培养体系的防御响应机制.适当浓度的taxol(10μM)和taxotere(35 μM)可诱导细胞产生防御响应,包括明显的H+跨膜内流和活性氧积累的早期防御响应以及随后活化PAL和促进taxol合成的晚期防御响应.采用二维凝胶电泳技术,分析了taxol诱导细胞产生早期防御响应的蛋白表达差异,发现taxol诱导了10个新蛋白点的表达,其中一些新蛋白点的分子量与细胞信号分子G-蛋白、Ca2+依赖蛋白激酶的分子量接近.应用NADPH特异性抑制剂研究发现NADPH氧化酶激活是外源taxol和taxotere诱导细胞产生活性氧产生的主要机制,H,2O,2是活性氧积累的主要成分.系统分析了taxol和taxotere在有、无细胞培养介质中,浓度的动态变化规律和考察了通过改变细胞膜通透性taxol的释放的机制,结果显示胞内taxol的释放存在逆浓度的过程,膜通透性的增大在一定程度上促进了taxol释放,但并不是主要机制,红豆杉细胞对taxol的运输可能存在着主动运输系统. 【文摘语种】 中文文摘 红豆杉细胞培养中紫杉醇代谢调节的研究 【 摘　要 】 紫杉醇是从红豆杉植物中提取的一种新型抗癌药物.紫杉醇在植物组织中的含量很低,而且植物组织或其细胞培养物的粗提样品中含有较多的杂质不宜分离.高效液相色谱(HPLC)逐渐显示出在分离、检测紫杉醇和BacctinⅢ等化合物方面的优势.采用岛津SPD-10AVP型HPLC,乙腈:水梯度洗脱检测,可以精确分离紫杉醇及其前体物质,紫杉醇和BacctinⅢ在0.01-0.25mg/ml范围内峰面积和浓度线性良好,结果标准曲线方程为:紫杉醇C=2.4×10-8×S-0.002;BaccatinⅢC=2.9×10-8×S-0.014.精密度RSD2﹪(n=5).电镜观察结果表明植物细胞的超微结构和细胞代谢特征、次生代谢物的积累有明显相关.次生代谢物含量高的细胞中有类似的结构特征:细胞质浓厚,内容丰富,细胞器丰富,质体发达;次生代谢物含量低的细胞则相反.采用合适材料,可以进一步揭示植物培养物分化与次生代谢产物积累的相关性. 【论文题名】 紫杉醇分离纯化工艺过程的研究 【 摘　要 】 该文对紫杉醇分离纯化工艺过程进行了系统的研究,并就紫杉烷类物质结构对色谱过程的影响及键合态紫杉醇的解离也进行了初步研究.对紫杉醇色谱分离纯化过程的分析表明,紫杉烷类物质的母核骨架结构主要是影响紫杉烷类物质的正相色谱行为,而侧链结构则控制着紫杉烷类物质的反相色谱特征;分离纯化紫杉醇的最佳工艺选择是正反相色谱过程联用,以先进行正相色谱过程,再铺以反相色谱过程为佳;阴阳混合离子交换树脂可以使键合态紫杉醇发生裂解,脱去键合的大分子物质,游离出紫杉醇. 【论文题名】 紫杉醇对肝癌细胞增殖及凋亡的影响及其对肝癌、胆管癌细胞自分泌运动因子的抑制作用 【 摘　要 】 目的:1.研究紫杉醇(paclitaxel,PTX)对SMMC-7721肝癌细胞增殖及凋亡的影响,并与顺铂(DDP)、阿霉素(ADM)的作用进行比较,阐明PTX诱导肝癌细胞凋亡的特点.2.研究PTX对SMMC-7721肝癌细胞、HCCC-9910胆管癌细胞自分泌运动因子(autocrine motility factor,AMF)表达的影响,探讨PTX抑制肿瘤细胞运动可能的机制.方法:1.MTT比色法测定PTX、ADM、DDP对SMMC-7721肝癌细胞生长增殖的影响.2.流式细胞仪检测PTX、ADM、DDP诱导SMMC-7721肝癌细胞凋亡周期各期比例和凋亡率的影响.3.RT-PCR测定AMF在SMMC-7721肝癌细胞及HCCC-9910胆管癌细