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内皮祖细胞与血管再生 【关键词】内皮？祖细胞？新生血管化， 生理性 最近十年，干细胞研究取得了许多突破性 的进展，并已成功地在人体或动物的各个器 官中分离出了干细胞，包括骨髓、外周血、 脑、肝脏，生殖器官等。内皮祖细胞也已经 成功地从骨髓及外周血中分离出来。研究发 现，EPCs与造血干细胞有共同的前体细胞， 它参与生理或病理的新血管生成，对其表面 标志、动员、定向诱导分化及其在机体血管 新生、心血管疾病与肿瘤治疗中的作用进行 了广泛的研究。 1 EPCs与新血管生成 新血管生成包括两个基本过程，即血管新 生和血管生成。血管新生成是指内皮前体细 胞，即成血管细胞分化成内皮细胞形成原始 血管网的过程。血管生成是指从已存在的血 管以生芽方式长出新毛细血管的过程。 胚胎 时期机体通过血管新生和血管生成两个过 程形成新血管，成年后新血管的形成起先被 认为仅由血管生成过程所形成， 即由预先存 在的内皮细胞增生和迁移所控制， 但通过对 外周血EPCs的观察和研究[1, 2],人们对 于生后新血管形成的理解有了新的认识， 即 不仅存在血管生成，也包括血管新生。 2成人中EPCs的概况 成人循环中EPCs存在的证据在胚胎，有 证据显示造血干细胞和 EPCs起源于共同的 前体细胞——成血管细胞:3, 4]。在胚胎 发展过程中，多个血岛先形成一个卵黄囊毛 细血管网:5],它是动静脉血管系统基础， 并最终形成早期的血液循环。那些能产生造 血细胞的HSC驰于血岛中央，而EPCs即成 血管细胞则位于血岛的外围。除了这种排列 上的关系，HSC蹄EPCs还具有共同抗原， 包括CD34血管内皮生长因子受体 2,Tie2 , CD117及干细胞抗原1 [6]。造血干细胞存 在于外周血及骨髓中，人们便开始考虑与之 关系密切的EPC河能也存在于上述组织中。 最近，人们使用胚胎期EPC昕口 HSCs共有的 抗原VEGFR2 CD34及CD133将EPCs成功地 从循环单个核细胞中分离出来:1, 7, 8］。 在体外，这些细胞分化成不同的内皮系细胞， 在动物缺血模型中，异种的、同种的、自体 的EPCs已证明可参与新血管生成。最近， 有报告从脐带血中分离出来的 EPCs可在体 内及体外分化成内皮细胞:9~12］。 循环中EPCs的分离及诱导分化 目前，尽 管EPCs跟HSCsW共同的表面标记物如 AC133 CD34或VEGFR2但还是无法从原始 的HSC盼离出“未成熟EPCs。目前认为， 在循环中EPCs^在于表达AC133和VEGFR 标记物的CD34阳性的亚细胞群中:8］。循 环中的EPCs表达干/前体细胞标记物，如 CD34或VEGFR2但无AC133同时开始表达 内皮系的特殊标记物，如 VE粘钙蛋白或E 选择蛋白。另一方面，随着定型和分化成造 血干/前体细胞，AC133和VEGFR2勺表面标 记物逐渐消失，这些干/前体细胞标记物没 有在分化成的造血细胞上表达。AC133是区 分未成熟EPC戚原始HSC点循环EPCs的 标记物。而区分 EPCs与造血干/前体细胞， 可以采用VEGFR2VE粘钙蛋白或E选择蛋 白。另外，循环的EPCs也不能表达单核细 胞或骨髓的标记物，如CD14或CD15因此， 循环EPCs可以通过CD34 VEGFR邪VE粘 钙蛋白的抗原性选择分离出来， 循环未成熟 EPCs则可以通过AC133分离。EPCs^R HSCs 共有许多表面标记物，通常认为 EPCs包含 从成血管细胞到完全分化的内皮细胞的不 同阶段的一群细胞，因此有许多不同的分离 EPC的方法报道:1, 2, 8~11］。此后，研究 者发现，体外通过碱性成纤维细胞生长因子、 胰岛素样生长因子1和血管内皮生长因子等 生长因子对细胞分化进行诱导和控制， 体外 培养可分化出内皮细胞谱系， 并于体内证明 其具有生成血管能力，表达相应的细胞的细 胞标志，用Fvl11/vWF染色，证实其具有内 皮细胞的特征，说明了 EPCs是CD34+S胞重 要亚群，而且体外在VEG两bFGF参与下能 有效地扩增［13］。目前经常先用密度梯度 离心法分离出骨髓或外周血单个核细胞， 然 后采用免疫磁珠等办法分选出 CD34+ffl胞， 在含有 VEGF IGF1、bFGF的培养液中培养， 在各种生长因子诱导下得到贴壁细胞就是 EPCs另外，因为AC133可以区分成熟内皮 细胞及内皮祖细胞，所以也可以应用 AC133 来作筛选，分离出AC133%田胞，然后再进行 诱导分化，也可以得到EPCs而且可以排除 血管壁脱落的成熟内皮细胞。 EPCS勺动员骨髓来源的EPCs^与生理及 病理的新血管生成已经被各种动物实验所 证实。研究表明组织创伤能动员造血系统中 的造血细胞及多潜能干细胞或前体细胞。 最 近的研究显示骨髓来源