可用作兔elisa试剂盒测定的标本十分广泛体液如血清.docxVIP

可用作兔ELISA试剂盒测定的标本十分广泛，体液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液）、 细胞培养上清、细胞、组织等均可作标本以测定其中某种成份。有些标本可直接进行测定，有些 TOC \o 1-5 \h \z 则 需 经 预 处 理。 血 清： 室温血液自然凝固 10-20 分钟后，离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）。收集上 清 。 如 有 沉 淀 形 成， 应 再 次 离 心。 血 浆： 应根据试剂盒的要求选择 EDTA 、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，加入 10 % （ v/v ）抗凝剂 （0.1M 柠檬酸钠或 1% heparin 或 2.0%EDTA.Na2） 混合10-20 分钟后，离心20 分钟 左 右 （2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。如有沉淀形 成，应再次离心。 尿 液、 胸 腹 水、 脑 脊 液： 用无菌管收集。离心 20分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。如有沉淀形成， 应 再 次 离 心 ? 兔 ELISA 试 剂 盒 细 胞 培 养 上 清 ： 检测分泌性的成份时， 用无菌管收集。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转/分）。仔细收 集 上清。检测细胞内的 成份时，用PBS （ PH7.2-7.4 ）稀释细胞悬液， 细胞浓度达到 100 万 /ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20 分钟左右（2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心 ? 细 胞： 检测细胞的成份时，对于贴壁细胞，去除培养液，用PBS 检测细胞的成份时，对于贴壁细胞，去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。加 入适量裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞 10 秒后，细胞 就会被裂解。对于悬浮细胞，离心收集细胞，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍 .加入适 量裂解液，用枪吹打把细胞吹散。用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉 淀。如果细胞量较多，必需分装然后再裂解。充分裂解后， 10000-14000g 离心3-5 分钟，取 上 清 ， 即 可 进 行 后 续 操 作 。 . 组 织 标 本 : 切割标本后，称取重量。加入一定量的 PBS或组织蛋白萃取试剂，缓冲液中可加入蛋白酶抑制 剂。用手工或匀浆器将标本匀浆充分。 离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。兔ELISA 试 剂 盒 仔 细 收 集 上清置于-20 度或-70度保存，如有必要，可以将样品浓缩干燥。分装后一份待检测，其余 冷冻备用