动物微生物及免疫学(实践教学)实验报告[参考].pdfVIP

四川农业大学 动物微生物及免疫学（实践教学） 实验报告 组长： ********** 组员： ********** 二零一二年四月 1 一、 实验目的 （一） 掌握一般培养基的制备原理及要求，掌握培养基酸碱度的测定， 熟悉一般培养基的制备过程和各种器皿灭菌方法。 （二） 掌握细菌分离培养的基本要领和方法，掌握细菌抹片的制备方法 和革兰氏染色法及油镜的使用方法，并认识革兰氏染色的反应特性。 （三） 掌握学习用微生物学原理诊断疾病的一般方法及步骤。 二、 实验用品 （一） 器材 量筒、烧杯、电子天平、漏斗、三角烧瓶、空试剂瓶、玻璃棒、玻璃平 皿、刻度吸管、 pH试纸、纱布、脱脂棉、天平、电炉、试剂瓶瓶塞、扎 绳、放大镜、包装纸、洗耳球、酒精灯、载玻片、火柴、吸水纸、剪 刀、记号笔、接种环、注射器、镊子、钳子、毫米尺、培养箱、水浴培 养箱、高压蒸汽灭菌锅、油镜 （二） 试剂及材料 肘胨、蛋白胨、猪胆盐、氯化钠、琼脂、乳糖、 0.01%结晶紫水溶液、 0.5%中性红水溶液、血清、胰化蛋白胨、酵母提取物、氢氧化钠、盐 酸、牛血清、革兰氏染色液、蒸馏水、小白鼠、病猪内脏 三、 实验步骤 （一） 培养基的制备 （所有用到的器皿都已 121℃高压灭菌 15~30min，倾注平板在无菌操作台内完成，并放在 无菌操作台内） 1、 麦康凯培养基 （1） 组成：蛋白胨 17g、肘胨 3g、猪胆盐 5g、氯化钠 5g、琼脂 17g、乳糖 10g、0.01%结晶紫水溶液 10ml、0.5%中性红水溶液 5ml、蒸馏水 1000ml 2 （2） 方法：将蛋白胨、肘胨、猪胆盐和氯化钠溶解于 400ml 蒸馏水中，调节 pH至 7.2 。将琼脂加入 600ml 蒸馏水中 ，并加入 乳糖，加热熔化。将两 液混合，分装于烧瓶内，用纱布、扎绳等捆好后， 121℃高压灭菌 15~30min。待冷却至 50 ~ 55 ℃ 时，加入结晶紫和中性红水溶液，摇匀 后倾注平板。 注：结晶紫和中性红水溶液配好后需经高压灭菌。 2、 血清平板 （1） 组成：营养琼脂、牛血清 （2） 方法：将灭菌的营养琼脂加热熔化，冷却至 45~50℃时，加入 牛血清，并 混匀，倾注平板。 注：不得将牛血清一并加入后再灭菌。 3、 LB培养基 （1） 组成：胰化蛋白胨 10g、酵母提取物 5g 、氯化钠 10g、琼脂 15g （2） 方法：在 950ml 蒸馏水中加入胰化蛋白胨、酵母提取物、琼脂和氯化 钠，调节 pH至 7.4 ，加热熔化，分装于瓶中，用纱布、扎绳等捆好后， 121℃高压灭菌 15~30min。待冷却至 50 ~ 55 ℃ 时，倾注平板。 4 、 液体培养基（在 LB培养基的基础上，装入大试剂瓶中，不加琼脂，不分 装） （二） 病料取材 在病猪死亡后，首先用显微镜检查其末梢血液膜片中是否有炭疽杆菌存 在，未发现，则立即用消毒的器械对其进