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使用微载体在生物反应器中制备 Vero 细胞狂犬病疫苗的试验 一、材料 1、 微载体 GE 公司 Cytodex 1 ，25g 2、 生物反应器 上海日泰公司 Cellipower 5L ，工作体积 3.5L 加微载体 25g（约 7g/L ） 3、 细胞、毒种、培养液 二、操作过程 1、 微载体处理、反应罐准备 取微载体 25g 用 PBS溶液洗涤几次后室温下浸泡膨胀过夜。弃去上清液，将载体转移到 2L 瓶内加入 PBS约 1L，灭菌后备用。 将微载体装到生物反应罐内， 换上新的 PBS溶液 4L，安装好生物反应罐灭菌（126℃ *80min ）。 2、 生物反应器校正、调试 反应罐灭菌前调试生物反应器， 确保能正常运行， 各参数正常。用 pH 为 7.0/10.0 的标准缓冲液校正 pH电极 2 次。灭菌后，温度 37℃校正 DO电极。 3、 预培养 DO 电极校正完后，关闭进气，停止搅拌，过 15 分钟待载体沉降后排空上清液，加入 199 培养液 3 L 浸泡处理载体，浸泡 3 小时后同样关闭进气停止搅拌 15 分钟后排空上清液，加入 7.5%新生牛血清培养液 3L ，设置温度 37℃、 pH7.2、DO 50、搅拌转 速 60RPM，预培养过夜，留意反应器运行是否正常，各参数是否稳定能调控。 4、 接种细胞 接种细胞当天先排空反应罐内预培养的 7.5%新生牛血清培养液，