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无菌体液细菌培养的新方法探讨 【摘要】 目的：探讨无菌体液培养的 最佳方法。方法：对278份无菌体液标本用 双相液体培养基法和直接接种法培养分离 细菌。结果：双相液体培养基检测 278份标 本，40份培养出细菌，阳性率为％,直接接 种法培养19份标本培养出细菌，阳性率为％, 经SPSS软件处理，x 2检验，，差异有非常 显着性。结论：用双相液体培养基法培养无 菌体液标本，可明显提高细菌检出率，是较 好的方法。 【关键词】 无菌体液；细菌培养；双相液 体培养基 无菌体液（胸腹水、关节液、胆汁、脓液等） 标本细菌培养是诊断各种细菌感染的一种 重要方法。直接接种法（传统方法）细菌培养 阳性率低，往往易造成误诊，为改变上述现 状，作者经过两年的研究，终于发现一种新 的细菌培养方法，即能做到床边接种又能增 菌分离，现报告如下。 1材料和方法 材料 标本来源 278份标本为我院住院患者标本，其中 胸腔积液52份，腹水51份，脑脊液49份， 腹透液53份，胆汁37份，脓液36份。 培养基 双相液体培养基（上海奥普生物医药有 限公司提供）。 方法 标本采集 双相液体培养基接种法 临床医生床边采样（立即接种），无菌操 作采集无菌体液标本A 3 ml,注入双相液体 培养瓶内，充分混匀，并覆盖整个固相培养 基，立即送实验室，置35 C孵育箱培养。 直接接种法 用接种环直接接种血平板、巧克力平板 和麦康凯平板，置35 C孵育箱培养。 结果判断 次日将培养瓶取出，观察液体是否混浊, 固相是否有菌落和菌苔生长，若无菌生长或 混浊，继续培养。如有菌生长，立即涂片染色 镜检、鉴定和药敏实验，48 h无菌生长,报 告未见细菌生长。 鉴定 涂片、染色分属后，采用珠海黑马生物 鉴定板进行鉴定、药敏［1, 2 ］。 2结果 两种方法检测分离出的细菌标本数 用双相液体培养基检测 278份标本，40 份培养出细菌，阳性率为％。胸腔积液标本 阳性8份，阳性率％，腹水标本阳性8份，阳 性率％，脑脊液标本阳性5份，阳性率％，腹透 液标本阳性8份，阳性率％胆汁标本阳性6 份，阳性率％,脓液标本阳性5份，阳性率％ 而用直接法培养，仅有 19份标本培养出细 菌，阳性率为％。各标本培养出的阳性标本 数分别是：胸腔积液5份，腹水4份，脑脊 液2份，腹透液3份，胆汁3份，脑脊液2 份；阳性率分别是：％ % % % % %经 统计学软件SPSS处理，x 2检验，P＜，结 果差异有非常显着性。 两种方法检出时间及阳性率 用双相液体培养基培养检出 40株细菌， 18 h?24 h检出38株，24 h?48 h检出2 株；直接法培养检出 19株细菌，18 h?24 h 检出16株，24 h?48 h检出3株，各菌属 细菌检出时间情况见表 1。表1双相液体培 养基和直接法各菌属细菌检出时间份 （略） 双相液体培养基内检出细菌种类 278份标本在双相液体培养基内检出 40 株细菌，肠杆菌属15株，葡萄球菌属8株， 肠、链球菌属6株，非发酵菌6株（%）,真 菌5株，各菌属检出情况见表 2。表2双相 液体培养基检出的细菌种类份（略） 3讨论 双相液体培养基是由固相和液相组成。固 相是一块透明的琼脂面， 固定在瓶内壁的一 侧，含多种营养物质，能观察到菌落和菌苔， 直接作鉴定和药敏。 液相肉汤也含有丰富的 营养成分，如多种生长因子、氨基酸、血红 素、维生素B6等，除常见菌生长良好外， 苛养菌也生长较好。 本研究从278份体液标本中分离出40株细 菌，其阳性率为％,而直接接种法 278份标 本只分离出19株细菌，阳性率为％,经x 2 检验，而直接接种从采样到接种耗时较长， 尤其不能及时接种时，易造成某些细菌死亡， 影响培养结果。标本接种量大，约 3 ml,而 直接接种法标本量少，约 10 p l。双相液体 培养基固相可以分离细菌，液相具有增菌作 用，其营养成分丰富，适宜大部分细菌快速 生长。每天8时、11时、15时、18时四次 充分混匀，及时接种，有利于细菌快速生长， 提高检出率。 表1显示：该培养基阳性检出时间， 24 h 内检出阳性数占95%, 24 h?48 h内检出 阳性数5%,于直接接种法阳性检出基本一 致，与仪器血培养仪作体液标本培养相比检 出时间快一倍:3］。因为仪器阳性报警后， 需要转种分离分纯18 h?24 h后才长出细 菌。 278份标本在双相液体培养基内检出 40株 21种细菌，尤其是检出苛养菌，还培养出既 往用直接接种法很少培养出的少见菌， 说明 培养基适合多种细菌生长。 从表2检出细菌 构成比的情况看，前三位是肠杆菌科细菌、 葡萄球菌属、非发酵菌，与文献报道一致［4, 5］。 此法从采样到培养操作简单，由医生直接 接种，标本送实验室，不需转种平板，直接 放入孵育箱培养，固相长出菌后