病理检验技术 3.糖原及粘液染色法 糖类—糖原.pptxVIP

病理检验技术;特殊染色;糖类 ;糖原;(一)试剂配制 1. 0.5%的高碘酸 2. 1mol/L盐酸 3. 无色品红液 4. 0.5%的偏重亚硫酸钠 5. Mayer苏木精液 6.1%的淀粉酶或唾液 7. 唾液 ;(二)染色步骤 1. 新鲜薄片组织,立即用 Gendre液固定3~6小时或 Camoy液固定1~3小时,然后转入95%的乙醇,期间可更换1~2次95%的乙醇。 2. 第二天上午转入无水乙醇按常规脱水透明浸蜡,石蜡包埋,切片厚4μm。 3. 取两张连续切片,分别作A和B记号,然后把B片脱蜡至水(在水中仅稍水洗)。 4. 把B号切片浸入预热至37℃1%的淀粉酶,于37℃的恒温箱内消化1小时,或用预热至37℃的唾液于37℃的温箱消化30分钟。 5. 取出切片稍水洗。 6. 在B片消化过程中,把A片脱蜡至水。 ;(二)染色步骤 7.在A和B两片同时滴入0.5%的高碘酸氧化5~8分钟。 8.流水冲洗2分钟,再用蒸馏水浸洗2次。 9.切片浸入无色品红液(加盖)于暗处作用15~20分钟。 10.0.5%的偏重亚硫酸钠滴洗2次,每次2分钟。 11.流水冲洗5分钟。 12. Mayer苏木精浅染胞核约3分钟。 13.流水冲洗10分钟。 14.常规脱水透明,中性树胶封固。;(三)结果 未经消化的A片胞质内阳性的红紫色颗粒为糖原,经消化后的B片应为阴性,胞核呈蓝色。 如不作消化对照,组织上出现PAS阳性物质主要有糖原、甲状腺滤泡胶质、消化道、呼吸道和唾液腺的上皮黏液、垂体的嗜碱性细胞、软骨基质、真菌、上皮的基膜、纤维蛋白、胶原纤维、中枢神经系统均呈红紫色。;(四)注意事项 1. 高碘酸和偏重亚硫酸钠液应用小口砂塞瓶盛装塞紧密封置冰箱保存,可使用数月。用高碘酸氧化,比其他氧化剂优越,因为它不会把所形成的醛基进一步氧化 2.碱性品红有不同的厂牌和批号,有些纯度较高,可以少加活性炭。若配好的无色品红液仍呈微淡红色时,可再加入一些活性炭摇匀后过滤,这就使溶液无色,这样的碱性品红仍可使用。 3.偏重亚硫酸钠或钾盐均可使用,但质量一定要纯,要有较浓的刺激性气味,否则作用效果不好就配制不成功。偏重亚硫酸钠用后一定要密封好。 4.在配制过程中所用的玻璃器皿要求十分干净,一般要用硫酸洗液浸洗过。5.不要在蒸馏水沸腾时加入碱性品红,应在停止加热取出蒸馏水待1分钟后才加入，否则沸腾的水蒸气会把碱性品红液喷溅出来。;(四)注意事项 6.无色品红液要放冰箱保存,临用前半小时取出恢复至室温,用后又倒回原瓶内放冰箱保存。如此可反复使用多次,至溶液出现淡红色时才倾弃不用。 7.切片在无色品红液作用的时间随室温而定,夏季若室温高,作用10分钟已足够,冬季室温低,可延长至20分钟左右。 8.本法如用 Harris苏木精染胞核,则必须经盐酸乙醇分化,否则糖原带紫蓝色而不鲜艳。 9.用 Gendre液固定的组织,糖原呈粗颗粒状。 Carnoy液固定的组织,糖原呈细颗粒状。 10.淀粉酶如存放过久,很易失效。因此,新买回来的淀粉酶要经过试验(消化已知含糖原的切片)才能使用。唾液的消化作用很强,操作虽然麻烦一些,但效果较好。;(五)染色机制 碱性品红液经亚硫酸作用生成无色品红液(又称 Schiff试剂)。高碘酸是一种氧化剂，它能破坏多糖类结构的碳键。组织切片首先用高碘酸氧化,使存在于组织内多糖分子的两个相邻带有羟基的一C—C—一键打开,生成二醛。 其后,暴露出来的游离醛基与无色品红液作用,生成新的红紫色复合物而显示出来。;(一)试剂配制 1. Harris苏木精液 2. Best胭脂红贮备液 3. Best朋脂红工作液 4 .Best分化液20ml ;(二)染色步骤 1. 新鲜薄片组织立即固定于 Gendre液或 Camoy液中。 2.切片脱蜡至水. 3. Harris苏木精液染5~10分钟。 4. 稍水洗。 5. 1%的盐酸乙醇稍分化。 6. 流水冲洗10钟。 7. 浸入Best胭脂红工作液(加盖)染20~30分钟。 8. 不用水洗,直接用Best分化液浸洗2次(把切片提高又放下),每次1~3秒。 9. 95%的乙醇浸洗,再用无水乙醇脱水3次。 10. 二甲苯透明,中性树胶封固。;(三)结果 糖原颗粒呈鲜红色,胞核呈蓝色。 (四)注意事项 1. 如需作消化对照,可按上法的步骤进行。 2. 在用水浴煮沸胭脂红储备液时,应出现较强烈的泡沫,否则应该是所用的药物不够纯。 3. 配制胭脂红贮备液和胭脂红工作液的氢氧化铵要有足够浓度,染片时要用密盖的高身染色盅盛装染液。 4. 染色时切片从Best胭脂红工作液取出后,应立即用Best分化液分化。不要让切片干燥,更不能水洗。 5. Best胭脂红贮备液必须密塞装载存于冰箱,一般可保存3~6个月。Best胭脂红工作液仅限