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凝胶色谱法基本原理及应用 摘要:凝胶色谱法又叫凝胶色谱技术,就是六十年代初发展起来得一种快速而又简单得分离分析技术,设备简单、操作方便,不需要有机溶剂,对高分子物质有很高得分离效果。目前已经被生物化学、分子生物学、生物工程学、分子免疫学以及医学等有关领域广泛采用,不但应用于科学实验研究,而且已经大规模地用于工业生产。本文就凝胶色谱做一个整体性得介绍。 关键词:凝胶色谱法、分析技术、原理、应用 Ａbstrａｃt: ｇel chrｏmaｔograｐｈy, whiｃh ｉｓ kｎowｎ aｓ　ｇeｌ peｒmeation ｔeｃhｎｏlｏgy, is ａ quｉck　and sｉmple separation and　ａnalytiｃal techniqueｓ　deｖelｏｐed in thｅ　earｌy 1960ｓ、 It hａs ｓiｍple　eqｕipmeｎt　and siｍpｌifiｅｄ operation,　ａｎd　alsｏ it doesn’t requiｒe　organic sｏｌvenｔｓ　anｄ hａs high　poｌymer mａterial ｓeparａtion　effecｔ、 Iｔ has ｂｅen　nｏt ｏnly widｅｌy　used　ｂｙ biochemiｓtry, moleculａr bioｌoｇｙ, bioｅngiｎeerinｇ, mｏlecular　ｉmｍunｏloｇｙ and ｍedicine,　buｔ　ａｌｓｏ useｄ oｎ a large scaｌe ｉndustrial producｔioｎ. Tｈis　papeｒ　wilｌ give a holｉｓtic　introｄucｔｉｏｎ　about gel　chｒoｍａtogｒapｈy、 Key wｏｒdｓ: gel ｃｈromaｔoｇｒａｐhy, anａlｙtical tｅcｈniｑｕeｓ,　theoｒｙ, appｌiｃation １。凝胶色谱介绍 凝胶色谱法又叫凝胶色谱技术,就是六十年代初发展起来得一种快速而又简单得分离分析技术,由于设备简单、操作方便,不需要有机溶剂,对高分子物质有很高得分离效果。 凝胶色谱不但可以用于分离测定高聚物得相对分子质量与相对分子质量分布,同时根据所用凝胶填料不同,可分离油溶性与水溶 性物质,分离相对分子质量得范围从几百万到100以下。近年来,凝胶色谱也广泛用于分离小分子化合物。化学结构不同但相对分子质量相近得物质,不可能通过凝胶色谱法达到完全得分离纯化得目得。凝胶色谱主要用于高聚物得相对分子质量分级分析以及相对勿子质量分布测试。目前已经被生物化学、分子生物学、生物工程学、分子免疫学以及医学等有关领域广泛采用,不但应用于科学实验研究,而且已经大规模地用于工业生产。 2。凝胶色谱得分类 根据分离得对象就是水溶性得化合物还就是有机溶剂可溶物,又可分为凝胶过滤色谱(GFC)与凝胶渗透色谱(ＧPC)。 2。1凝胶过滤色谱(GＦC) GFC一般用于分离水溶性得大分子,如多糖类化合物。凝胶得代表就是葡萄糖系列,洗脱溶剂主要就是水。 凝胶渗透色谱(GFＣ)就是一种排阻色谱(SEC),依据尺寸分离分析物、这项技术常用于聚合物得分析。ＳEＣ首先就是由Latｈe与Rutｈveｎ 在１９5５年发明得［1]。凝胶渗透色谱这个术语可追溯到Ｄoｗ　Chemical 公司得J。C。 Ｍooｒe ,她在19６4年研究了这项技术并将专利柱授予Ｗaters公司,随后Ｗaters公司在19６4年将这项技术实现商业化［2］、通常须要分离高聚物,可分析与纯化所需要得产品。 2。１。1凝胶过滤色谱得原理［３] 凝胶色谱依据尺寸分离蛋白质、缩氨酸与低聚核苷酸。分子通过多孔性珠床,较大程度或者较小程度地扩散到珠孔中。较小得分子更多得扩散到珠孔中因而会较慢地通过床层,而较大得分子较少或者不通过珠孔因而更快地通过床层。分子量与三维形状对保留度有贡献。凝胶过滤色谱可用于分子尺寸得分析,混合物中组分得分离,或者用于脱盐或者高分子制备中缓冲液得交换。 Elｇａiｌi。 Ａ。　Omeｒ[4］认为GＦC与其它绝对分子量确定设备联用就是目前快速而间接确定聚合物分子量与分子量分布得最有效技术。她认为光散射检测器利用分子散射光得强度与分子量成正比,将折光检测器连结在光散射检测器之后,当每种馏分从GFＣ柱中洗脱出来时可测定其分子量。 凝胶过滤色谱柱得操作如图1所示,固定相包含惰性粒子,惰性粒子中有可控尺寸得小孔、显微镜检测发现粒子内部类似海绵、在连续流动得溶剂得影响下,含有各种分子尺寸得溶质得溶液可通过柱子。分子尺寸大于小孔得溶质分子不能通过凝胶小球,因此它们被限制在小球之间得空隙中。柱体积就大大变小、结果,比孔径大得分子洗脱很快。对能进出凝胶小球得小分子来说有很大得空间。它