7b 表达6-120教堂 学习参考 文档.pdf

7. 外源基因 在大肠杆菌细胞中的表达 第二单元测验 河北农业大学生命科学学院，李莉云 8学时 7.1 真核基因在大肠杆菌细胞中的表达 7.2 原核表达载体 7.3 大肠杆菌基因工程菌的构建策略 7.4 基因表达产物的分离与检测 7.5 真核基因在原核细胞中表达的应用实例 7.6 基因表达调控研究方法－调控序列的分离 2 本章基本要求 基本要求：掌握真核基因在原核细胞中进行表达 需要的基本条件，掌握原核表达载体的结构，掌 握外源基因表达的影响因素，掌握基因表达产物 的检测方法，了解几种常用的原核和真核表达系 统，了解胰岛素的基因工程菌的构建过程。 重点：真核基因在原核细胞中进行表达需要的基 本条件，原核表达载体的结构，外源基因表达的 影响因素，基因表达产物的检测方法。 难点：原核表达载体的构建 3 知识回顾 原核与真核基因表达调控的差异 RNA polymerase Ⅰ 核仁 rRNA Ⅱ 核质 mRNA, snRNA Ⅲ 核质 tRNA, 5srRNA 启动子结构(图) mRNA 转录后加工 翻译起始信号 翻译后加工 4 提问：什么是启动子？有何结构特点 5 mature eukaryotic mRNA 一个完整的 mRNA 包括有 5‘端帽、5’非转译区、 编码区、3‘非转译区和poly(A)尾链。 UTR （Untranslated Regions)即非翻译区，是mRNA 分子两端的非编码片段。 5‘-UTR从mRNA起点的甲基化鸟嘌呤核苷酸帽延伸至 AUG起始密码子，3’-UTR从编码区末端的终止密码 子延伸至多聚A尾巴（Poly-A）的末端。 r.it/BIG/UTRHome/真 核生物mRNA非翻译区序列数据库 6 7.1 真核基因在大肠杆菌细胞中的表达 7.1.1 常用表达系统及其特点 原核细胞：大肠杆菌 (Escherichia coli) 枯草杆菌 (Bacillus subtilis) 乳酸菌 (Lactic acid bacteria) 沙门氏菌 (Salmonella typhimurium) 苏云金杆菌 (Bacillus thuringiensis) 真菌：酿酒酵母，毕赤酵母 真核细胞：昆虫细胞，哺乳动物细胞 植物细胞/组织 7 大肠杆菌表达系统的特点 优点：经典模型系统，克隆表达系统成熟 遗传背景清楚 ，全基因组测序， 4405个ORF 操作方便，培养简单，生长迅速，遗传稳定 异源蛋白高效表达 被美国FDA批准为安全的基因工程受体生物 缺点：潜