高产酒率酿酒酵母单倍体分离与杂交育种.pptVIP

许燕 摘要 本文在筛选获得一批酒精发酵力较强的二倍体酿酒酵母菌株的基础上,优化产孢 条件,应用筛选获得的高产酒精的单倍体菌株,经杂交育种构建高产酿酒酵母菌株 以二倍体菌株ZJD3-3、ZD3-4、ZJD3-7、ZJD3-9和ZD3-11(称为ZD3系列)及非 整倍体菌株c19为实验菌株,经对产孢培养基的优选,确认 McClary产孢培养基为适宜 的高产孢率培养基。在该培养基上经25℃、7天培养,酿酒酵母的产孢率可达到生7% 对ZJD3系列二倍体菌株进行单倍体分离,获得单倍体71株。对筛选所得单倍体菌株, 以及实验室原有单倍体菌株c36、c36-8、c36-9进行交配型和发酵性能测定,交配型 为a型的单倍体与交配型为α的单倍体数目差异较大。得交配型a的单倍体菌株30株 交配型α的单倍体菌株18株。从中筛选获得发酵性能较强的单倍体菌株4株,其中1株 为a型,3株为α型,发酵性能最强的zs-5菌株其同等条件下酒精发酵后的酒度高出二 倍体亲株4.5%。 以得到的4株强发酵菌株和单倍体菌株c36、c36-8、c36-9以及非整倍体菌株 c19为杂交亲株,分别进行群体杂交,发现不同交配型单倍体混合2h后开始出现哑铃型 细胞,平板分离培养48h后,经鉴定共获得杂合子124株,经酒精发酵测验,从中筛选 获得发酵性能优良的酵母菌株6株。结果表明,95%以上的杂合子酒精发酵性能优于杂 交亲株,最优者比杂交单倍体亲株提高17.7%,比原始二倍体菌株高15.5%。经杂交育 种与重复酒精发酵测验,最终确认zj-1、zj-2、zj-3、zj一、zj-5、zj6等6株 高产酒精的菌株,为进一步选育构建超级工程菌株奠定了扎实基础  前 酒精生产用酿酒酵母属于 中的酵母菌科成 要以出芽方式进行繁殖 属 利用酿酒酵母发酵糖 乙醇的历史非常悠久,目前世界乙醇 产量的8 阶段鹦巴燾繚逐醴忌楚告彌雄成共途驽主琴图内除段玺巖化 萄糖发酵生成乙醇的总反应简式 C6H2062C2H50H+2C02+能量 理论雨行湮发路哥点糖可集种空 享外,还生成少量的其他副产物,包括甘 的碳源将被用于形成副物 糖的利用率 工业规 ,糖醇 能力走的治盐交国铃统息会的持续盐默形继设封速增好转 康发展的瓶 2000年后,国家开始具体实施发展可再生 性、环保型 四省布局建设以农作物所含有淀粉或 畏较长使本五什果速到是生+地年39按已 乙醇的大规模生产消耗了数量比较巨大的淀 的市定的财政补贴,在日前 松糖E原都定点教麝到智 涨幅度已使燃料乙醇生产企 损边缘 其是要薏  长期以来,提高酵母酒精发酵的得率不外乎探索新发酵工艺和选育髙产 酿酒酵母菌株。高 株的选育主要是从自然界 精的酵母中分离 从自然界筛 酵母一般很难具有用于发酵工业生 匕培 种技术进行改 增强的酵母菌株 原生质体融合 原生质体融合和重组DNA技术实现高产酒率酿酒酵母菌株的构建 段阻断酿酒酵母甘油的合成或降低甘油的合成 以提高乙醇发醇的糖醇转化率,也已有实验室 得成功的报 业微生物优良菌株的选育从自然选择 自存拙、提 高选育效率等方面已取得长足的进步 业微生物遗传 多种或先后采用哪几种方法为宜,应根据所 榉裥且的真拒 模 结构组成与代谢调控体系复杂。酿酒酵母酒精发 酵的代谢,属细胞基础代谢范畴,酵母细胞高效率吸 谢生成乙醇的效 调控网络协调控制,属本源性多基因 局性高度协调的基因表达调 为地方 提升其代 使其良好适应环境多变的大规模工 效,技术 度极其大。作者所在实验室啻用高温热击、多级诱变为主的技术途径,在技 所突破,成功选 今后 行之有效的高产酵母选育方 该研究成 问世几近十年,工耗大、 费时多、周期长和效率低  现尚未见通过基因或代谢工程获得工业化高效率酒精生产菌株的报道。这 主要是由于基因工程技术在工业微生物育种方面虽已取得不少成果,但目前的 技术水平主要适用于新增受外源基因及其调控系统调控的代谢类型,或内源性 单基因、寡基因控制的代谢水平的提高。 酵母杂交在基础研究与酒精高产酵母选育方面,有关专著与论文中可见报 道,它是一种相对传统的微生物育种手段,通过杂交可以把不同菌株的优良经 济性状集于重组体中,克服长期用诱变剂处理造成的菌株生活力下降等缺陷;通 过杂交可以扩大变异范围,改变产品的质量和产量,甚至出现新的品种,实践 中已取得不少成果。例如,日本的小田等人用酒精酵母和卡尔斯伯酵母杂交获 得的杂交株,其乙醇产量和菌体生长量都比亲本有显著的提高,且发酵麦芽糖 的能力比亲株明显增强。但止目前尚未见较为系统地探索研究酒精生产