载脂蛋白b100apob100elisa试剂盒应用双抗体夹心法测.docxVIP

载脂蛋白 B100 (Apo-B100 ) ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中载脂蛋白 B100 (Apo-B100 )水平。用纯化的载脂蛋白 B100 (Apo-B100 )抗体包被微孔板，制成固相抗体， 往包被单抗的微孔中依次加入载脂蛋白 B100( Apo-B100 ),再与HRP标记的载脂蛋白 B100 (Apo-B100 )抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB显 色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深 浅和样品中的载脂蛋白 B100 (Apo-B100 )呈正相关。用酶标仪在 450nm波长下测定吸光 度(OD值)，通过标准曲线计算样品中载脂蛋白 B100 (Apo-B100)浓度。 载脂蛋白B100 (Apo-B100 ) ELISA试剂盒不可忽略的重点 固相免疫测定技术 需以洗涤操作将特异结合于固相的抗原或抗体与反应温育过程中吸附的非特异成份分离开 来，以保证ELISA测定的特异性。 洗板 是极其关键的一步！洗液尽量不要溢出孔外，加洗液后要静置 1分钟，甩去板孔中洗液后， 一定要大力拍干；及时更换吸水纸，尤其是拍过酶标记物的吸水纸一定要弃去， 否则可能影 响试验结果。 微量加样器加入样本 这一步是必然有的， 加样不可太快，要避免加在孔壁上部， 不可溅出和产生气泡。 加样太快， 无法保证微量加样的准确性和均一性。 加在孔壁上部的非包被区，易导致非特异吸附。溅出 会对邻近孔产生污染。出现气泡则反应液界面有差异。 有时候一份标本用相同的试剂盒这次测定为阳性， 下次测定为阴性，往往就是上述加样及试 剂的错误所致。 载脂蛋白B100 (Apo-B100 ) ELISA试剂盒试剂器材 1、 试剂盒提供包被抗体、酶标抗体、标准品，底物 (ABTS)、96孔elisa板。 2、 包被缓冲液、PBS、底物缓冲液配制同常规 ELISA法。 载脂蛋白B100 (Apo-B100 ) ELISA试剂盒操作步骤： 包被：pH9.5碳酸盐缓液稀释 4D7单克隆抗体粗提丫球蛋白至1^g/ml,加入96孔板,100 l/孔，放4C ,36小时。 封闭：0.1%吐温 PBS(Buffer A)冲洗 96 孔板三次，加 3%BSA Buffer A(Buffer B)200 卬 l/孔， 放37C ,1小时。 加待检样品：Buffer A 冲洗96孔板三次，加待检样品及 Buffer B 稀释的标准品100 l/ 孔，放37C ,3小时。 加酶标抗体：Buffer A冲洗96孔板五次，3%PEG Buffer A 稀释酶标抗体至 1 ： 800,加入 96孔板，100 l/孔，放37 C ,1小时。 显色：Buffer A冲洗96孔板五次，pH5.4柠檬酸缓冲液溶解底物 (ABTS),0.2mg/ml,加 3%H2O2,2 l/ml ,加入96孔板，100 /孔，室温下或 37 C显色。