组织糖胺多糖GAG总含量阿尔新蓝alcianblue比色法.docVIP

组织糖胺多糖（ GAG ）总含量阿尔新蓝（ alcian blue）比色法定量检测试剂盒 产品说明书（中文版） 主要用途 组织糖胺多糖（ GAG ）总含量阿尔新蓝（ alcian blue）比色法定量检测试剂是一种旨在通过高盐萃取可溶 性糖胺多糖，与阿尔新蓝染料结合，在丙醇解离溶液中，释放蓝色 染料，由分光光度仪比色分析，定量检 测组织样品中糖胺多糖含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适用于各 种人体或动物组织 （皮肤、 肌肉等）、软骨、结缔组织、 肿瘤组织等样品糖胺多糖水平检测。 产品严格无菌， 即到即用，操作简捷，性能稳定，检测准确。 技术背景 糖胺多糖（ glycosaminoglycan ； GAG ），又称为粘多糖（ mucopolysaccharide），是体内最为丰富的异源多聚 糖。糖胺多糖是一种未分叉的负电荷性长链多聚糖，由重复的二糖单位，包括六碳糖（ hexose）或己糖醛 酸（ hexuronic acid ），链接到己糖胺（ hexoamine）上而成。糖胺多糖与核心蛋白（ core protein ）共价相联， 构成蛋白多糖（ proteoglycan； PG），成为细胞膜和细胞外基质（ extracellular matrix ； ECM ）的主要成分。 蛋白多糖的糖胺多糖在合成过程中发生硫酸酯化（ sulfated group ），其部位在 O或 N位上，有利于发挥各种 不同的作用，包括酶的调节、细胞黏附、生长、迁移、分化，以及组织损伤反应。基于糖胺多糖的高度负 电荷的特点，使用异染性（ metachromatic）四价（ tetravalent）阳离子蓝色染料阿尔新蓝（ alcian blue），在 酸性条件下， 特异性的结合产生不溶性蓝色糖胺多糖染料复合物 （ Dye-GAG complex ），在丙醇解离溶液中， 释放出染料，通过分光光度仪（ 600nm波长）测定，来定量分析糖胺多糖的总含量。 产品内容 萃取液（ Reagent A） 12 毫升 高盐液（ Reagent B） 1.5 毫升 酸性液（ Reagent C） 10 毫升 染色液（ Reagent D） 1.5 毫升 清理液（ Reagent E） 25 毫升 解离液（ Reagent F） 25 毫升 标准液（ Reagent G） 100 微升 产品说明书 1 份 保存方式 保存在 4℃冰箱里； 染色液（ Reagent D）避免光照；试剂具有腐蚀性，注意操作安全；有效保证 3 月 用户自备 无离子水：用于配制工作液 1.5 毫升离心管：用于样品操作的容器 微型台式离心机：用于样品操作 1 比色皿或 96 孔板：用于比色分析的容器 分光光度仪或酶标仪：用于比色分析 实验步骤 一、 样品预处理 1． 手术取出动物组织，并秤重以确定 200 毫克组织重量 2． 移入到一个液氮冻存管 3． 即刻放进液氮罐过夜 4． 次日从液氮罐里取出，即刻（最快速度）用研磨棒碾碎组织成粉末状（注意： 切莫使组织冻融） 5． 放进一个 1.5 毫升离心管 6． 加入 500 微升 萃取液（ Reagent A） 7． 强力涡旋震荡 1 分钟，充分混匀 8． 放进 4℃冰箱里孵育 16 小时，期间涡旋震荡 1 分钟五次 9． 放进微型台式离心机离心 10 分钟，速度为 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415） 10．小心移取上清液到新的 1.5 毫升离心管 11．置于冰槽里备用 二、标准样品配制 1． 准备好 5 个 1.5 毫升离心管，标记为 1 至 5 号管 2． 分别加入 50 微升 萃取液（ Reagent A）到 1 至 5 号管 3． 移取 50 微升 标准液（ Reagent G）到 1 号管，混匀 4． 小心移取 50 微升 1 号管稀释的 标准液（ Reagent G）到 2 号管，混匀 5． 小心移取 50 微升 2 号管稀释的 标准液（ Reagent G）到 3 号管，混匀 6． 小心移取 50 微升 3 号管稀释的 标准液（ Reagent G）到 4 号管，混匀 7． 将 1 至 5 号管放进冰槽里备用；标准管浓度见下表 管号 萃取液（ Reagent A） 标准液（ Reagent G） 标准糖胺多糖含量 1 50 微升 50 微升 20 微克 2 50 微升 50 微升 1 号管 10 微克 3 50 微升 50 微升 2 号管 5 微克 4 50 微升 50 微升 3 号管 2.5 微克 5 50 微升 0 0 三、 标准曲线测定 检测开始前，移取 1.25 毫升 酸性液（ Reagent C）到 15 毫