核酸检测试剂生产及质量控制技术指导原则征求意见稿.docxVIP

附件 3： 体外诊断试剂生产及质量控制技术指导原则 —— 核酸检测试剂生产及质量控制技术指导原则 （征求意见稿） 核酸扩增检测技术泛指以扩增 DNA或 RNA为手段，从而筛查 特定基因的检测技术，如聚合酶链反应（ PCR）、连接酶链反应 LCR）、转录依赖的扩增反应（ TMA）等。核酸检测试剂是基于核酸扩增检测技术的体外诊断试剂，目前已经用于病原体检测、 特定疾病的早期诊断和体内物质的型别鉴定等不同领域。 为规范核酸检测试剂的生产及质量控制， 特制定本技术指导原则， 并将根据核酸检测技术的发展状况适时进行修改。 一、基本要求 1、核酸类检测试剂的生产企业应获得《医疗器械生产许可证》。 2、核酸类检测试剂的生产企业应具有与其技术要求相适应的人员、环境、设施和仪器设备等条件，建立专用实验室，配备 满足核酸提取和扩增检测以及操作人员防护所需的设备。 实验室应当严格分区， 人员和物品应当单向流动， 以最大限度地防止实验过程中样品之间的污染和避免扩增产物的污染。 3、核酸类检测试剂的生产企业应按照《体外诊断试剂生产 实施细则（试行） 》的要求，建立相应的质量管理体系，并应通 过《体外诊断试剂生产企业质量管理体系考核评定标准 （试行）》 的考核。 4、核酸类检测试剂的生产单位应当对试剂的使用范围作出 明确规定， 并经国家药品管理部门批准。 引物设计应当符合核酸 检测设计的要求， 扩增体系应设定合理的内标和外标， 试剂须设 置抗污染的特定措施，扩增产物须进行确证研究。 5、核酸类检测试剂的原材料应制订相关质量标准，应符合现行《中国药典》或《中国生物制品主要原辅料质控标准》的要求。使用未列入上述标准的化学试剂，应不低于分析纯。 二、原材料 应提供主要原材料如引物、 探针、企业参考品或标准品等的选择与来源、制备过程、质量分析和质量标准等的相关研究资料。如果主要原材料来自市场（从其他单位购买） ，应提供的资料包括：对物料供应商审核的相关资料、购买合同、供货方提供的质量标准、出厂检定报告，以及该原材料到货后的质量检验资料。 核酸类检测试剂的包装材料和耗材应无 DNase 和 RNase 污 染。 1、dNTP 脱氧三磷酸核苷， 核酸的组成成分， 包括：dATP、dUTP、dGTP、 dCTP和 dTTP。应为 HPLC纯、 PCR级，无 DNase和 RNase污染。 -20 ℃保存。 2、引物 由一定数量的核苷酸构成的特定序列， 通常采用 DNA合成仪 人工合成，合成后经聚丙烯酰胺凝胶电泳或其他适宜方法纯化。 冻干粉， 1800D以上。序列正确。 纯度应达到电泳级 （PAGE） HPLC级，不含杂带。应提供合成机构出具的合成产物的质检证明，如 PAGE电泳结果或 HPLC分析图谱。 应作 HPLC分析和紫外光吸收分析。以紫外分光光度计测定 OD260nm/OD280nm的比值在 1.6 2.0 之间，可视为合格引物。 -20 ℃保存。 3、探针 是指特定的带有示踪物（标记物）的已知核酸片段（寡聚核苷酸片段），能与互补核酸序列退火杂交，用于特定核酸序列的探测。通常采用 DNA合成仪人工合成， 合成后经聚丙烯酰胺凝胶电泳或其他适宜方法纯化，在 5- 端标记荧光素报告基团或其他发光标记物，在 3- 端标记荧光素淬灭基团，并经 HPLC或其他适宜方法纯化。 冻干粉， 90D 以上。纯度应达到 HPLC纯，不含杂带。应提 供合成机构出具的合成产物的质检证明，如 HPLC分析图谱；应 对探针的核酸序列及标记的荧光素或化学发光物进行核实， 并作 HPLC分析。应以可见—紫外分光光度计进行 200 800nm 扫描， 260nm处应有吸收峰。另外，根据标记的荧光素的不同，还应 该在荧光素的激发波长处有吸收峰， 如 FAM荧光素在 494nm、TET 荧光素在 521nm、TAMRA荧光素在 560nm处有特异的吸收峰，杂 交探针在 493nm、625nm、685nm处有特异的吸收峰，检定合格后 入库。避光、 -20 ℃保存。 4、Taq DNA聚合酶 具有 DNA聚合酶活性，无核酸外切酶活性及核酸内切酶活 性；具热稳定性， 94℃保温 1 小时后仍保持 50%活性。 -20 ℃保存。 5、UNG（尿嘧啶糖基化酶） 具有尿嘧啶糖基化酶活性，无核酸外切酶及核酸内切酶活 性，IU UNG在 37 ℃处理 3 分钟后， 103 拷贝以下含 U模版应完全降解，不能产生扩增产物。 -20 ℃保存。 6、RT-PCR酶（反转录扩增酶） 具逆转录酶活性和 DNA聚合酶活性，无核酸外切酶及核酸内 切酶活性；具热稳定性， 94℃1 小时后仍保持 50%活性， -20 ℃保 存。 三、生产工艺 核酸类检测试剂的基本生产工艺通常包括： 配制工作液、 半成品检定、 分