生物化学实验：醋酸薄膜电泳.pptVIP

醋酸纤维素薄膜分离血清蛋白 ?掌握醋酸薄膜电泳的原理及操作 ? 实验原理 ? 影响蛋白泳动快慢的因素 ◆ 蛋白的电荷 ?试剂和器材 ?试剂 ?器材 ? 实验操作 ?醋酸纤维素薄膜的润湿和选择,分辨光泽面和无光泽面 ?制作“滤纸桥”：联系醋酸纤维素薄膜和两极缓冲液 ?点样 在薄膜无光泽的一面点样 ?电泳 薄膜无光泽的一面(点样面)朝上,放在电泳槽支架的“滤纸桥”上.，点样区靠近负极。 150V电泳 50min ?染色 电泳完毕立即取出薄膜，直接浸入染色液中，染色5min。然后，用漂洗液浸洗，使背景颜色脱去。 ?几种血清蛋白的性质 * * ?实验目的 ? 掌握用醋酸薄膜电泳分离血清中各种蛋白组份 ?电泳: 带电粒子在电场中的泳动 ?电泳可采用不同的支持物 ◆醋酸纤维素薄膜(醋酸纤维素薄膜电泳) ◆聚丙烯酰胺凝胶(聚丙烯酰胺凝胶电泳) ◆琼脂糖凝胶(琼脂糖凝胶电泳) ? 蛋白是两性电解质 ◆ 在pHpI时，蛋白带负电，在电场中向正极泳动 ◆ 在pHpI时，蛋白带正电，在电场中向负极泳动 ◆ 蛋白的分子量 ?电泳可以分离不同的蛋白 新鲜血清-无溶血现象 巴比妥-巴比妥钠缓冲溶液（pH8.6，0.07mol/L，离子强度0.06）:称取巴比妥1.66克和巴比妥钠12.76克，溶于少量蒸馏水后定容1000毫升。 染色液：称取氨基黑10B 0.5