生物化学实验：二苯胺法测定DNA含量.pptVIP

二苯胺法测定DNA含量 二苯胺法 ? 实验材料 ? 计算 * * ? 目的 学习和掌握二苯胺法测定DNA含量的原理和方法。 ? 原理 紫外吸收法 定磷法 二苯胺法 冰醋酸，少量硫酸 DNA + 蓝色化合物 ￡ 在酸性溶液中，DNA与二苯胺共热生成蓝色化合物，该物质在595nm有最大吸收 ￡ 在40～400mg/mL范围内其峰值与DNA含量成正比 1. 试剂 200 μg/mL DNA标准溶液、二苯胺试剂 2. 器材 可见分光光度计、恒温水浴锅、移液管 ? 实验方法 4 0 2.0 5 光密度值 100℃恒温水浴中保温15min，冷却，在595nm波长处比色 4 4 4 4 4 二苯胺试剂/mL 0.4 0.8 1.2 1.6 2 蒸馏水/mL 1.6 1.2 0.8 0.4 0 标准DNA/mL (200 μg/mL) 4 3 2 1 0 试管 标准曲线的制作 光密度值 100℃恒温水浴中保温15min，流水冷却，在595nm波长处比色 4 4 4 二苯胺试剂/mL 1.6 1.6 2 蒸馏水/mL 0.4 0.4 0 待测液/mL 2 1 0 试管 样品测定 DNA含量(μg/mL) = 标准曲线查得值 X 5