DNA的蛋白质技术高中生物选修一专题52017人教版.pptVIP

? 专 题 整 合 DNA 与蛋白质的提取 ? 提取 DNA 利用的是 DNA 、 RNA 、蛋白质和脂质的理化 性质的差异。具体地说， DNA 与其他物质在不同浓度的 NaCl 溶液中溶解度不同，再通过冷酒精进一步去除其他 杂质。另外 DNA 对高温和洗涤剂的耐受性较高，不易被 破坏。鉴定时可采用二苯胺试剂沸水浴加热呈蓝色来判 断 DNA 的存在。 ? 提取与分离蛋白质是根据蛋白质的分子形状和大小，所 带电荷的性质和多少，溶解度、吸附性质以及对其他分 子的亲和力等理化性质，将不同种类的蛋白质分离开。 凝胶色谱法可以将相对分子质量不同的蛋白质有效分离。 ? DNA 与蛋白质的提取技术比较 ? 电泳法可将带有不同电荷的蛋白质分离。 DNA 材料 鸡血细胞等 DNA 含量相对 选取 较高的生物组织 细胞 加蒸馏水、加洗涤剂和食 血红蛋白 哺乳动物的成熟红细胞 加蒸馏水和甲苯充分搅拌 破碎 盐搅拌、研磨 去除 ①用不同浓度的 NaCl 溶液处理 ②用酒精溶液处理 ③用蛋白酶处理 ①透析处理 杂质 ②纯化处理 SDS — 聚丙烯酰胺凝胶 鉴定 加入二苯胺，沸水浴 电泳法测定蛋白质的 相对分子质量 PCR 技术与凝胶色谱法的比较 PCR ↓ ↓ 气泡 ↓ 凝胶色谱法 变性： 90 ℃以上高温解旋 凝胶色谱柱的制作 复性： 50 ℃左右引物与单 装填：凝胶装填均匀，无 链结合 ↓ 过程 延伸： 72 ℃合成子链 酶 温度 需要热稳定性高的 Taq DNA 聚合酶 高温 纯化 不需要酶 常温 DNA 粗提取与鉴定中不同试剂的用途 及原理比较 试剂 质量浓度 用途 原理 溶解 2 mol/L DNA DNA 在 NaCl 溶液中的溶解度随溶液浓 NaCl 0.14 析出 度的变化而改变，溶解度在质量浓度 溶液 mol/L DNA 为 2 mol/L 时最大、在质量浓度为 0.14 mol/L 时最小 鉴定时 2 mol/L 的溶剂 酒精 95% ( 体积 分数 ) / 除去杂 DNA 不溶于酒精，但是细胞中的某些 质以提 物质则可以溶于酒精 纯 DNA 鉴定 剂 DNA 遇二苯胺 ( 沸水浴 ) 会变蓝色 二苯 胺 柠檬 0.03 g/mL 抗凝剂 除去血液中的钙离子，防止血液凝固 酸钠 ? 【典例 1 】 下表是关于 DNA 粗提取与鉴定实验中所 使用的材料、操作及其作用的表述，正确的是 ( ) 。 试剂 A 柠檬酸钠 B C 蒸馏水 蒸馏水 操作 与鸡血混合 与鸡血细胞混合 加入到溶解有 DNA 的 NaCl 溶液中 加入到过滤后含 DNA 的 NaCl 溶液中 作用 溶解细胞 中 DNA 保持细 胞形状 析出 DNA 丝状物 产生特定 的颜色反应 D 冷却的酒精 ? 解析 在 DNA 的粗提取与鉴定实验中，柠檬酸钠可以 防止血液凝固；鸡血中加入蒸馏水可以使细胞膜和核膜 破裂； DNA 在不同浓度的 NaCl 溶液中溶解度不同，在 质量浓度为 0.14 mol/L NaCl 溶液中溶解度最低，有利 于 DNA 析出； DNA 不溶于酒精，可以获得较纯的 DNA ； DNA 遇二苯胺 ( 水浴加热 ) 产生蓝色反应 。 ? 答案 C PCR 技术操作注意事项 ? (1) 为避免外源 DNA 等因素的污染， PCR 实验中使用的 微量离心管、枪头、缓冲液以及蒸馏水等在使用前必须 进行高压灭菌。 ? (2) 在微量离心管中添加反应成分时，每吸取一种试剂 后，移液器上的枪头必须更换。 ? (3) 所有的成分都加入后，盖严离心管的盖子，用手指 轻轻弹击管的侧壁，混匀后离心处理，使反应液集中在 离心管底部。 ? (4)PCR 实验中应注意各种反应成分的用量，用量不当、 漏加成分、 PCR 程序设置不当等，均有可能导致 DNA 片 段扩增的失败。 ? (5)PCR 扩增的是位于两种引物之间的 DNA 片段，合理 设计引物是 PCR 成功的关键。 ? ? ? ? ? 【典例 2 】 PCR 实验中使用的微量离心管、缓冲溶液 以及蒸馏水使用前必须进行的关键步骤是