核酸提取氯仿异丙醇的作用.docx

用酚抽提细胞 DNA 时，有什么作用？ 使蛋白质变性，同时抑制了 DNase 的降解作用。用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白 与 DNA 联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶 于酚相，而 DNA 溶于水相。 使用酚的优点： 1. 有效变性蛋白质； 2. 抑制了 DNase 的降解作用。 缺点： 1. 能溶解 10-15% 的水，从而溶解一部分 poly （A）RNA 。2. 不能完全抑 制 RNase 的活性。 氯仿的作用？ 氯仿：克服酚的缺点；加速有机相与液相分层。 最后用氯仿抽提：去除核酸溶液中的迹量酚。 （酚易溶于氯仿中） 用酚－氯仿抽提细胞基因组 DNA 时，通常要在酚 - 氯仿中加少许异戊醇， 为什么？ 异戊醇：减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。异戊醇可以降低表面张力，从而 减少气泡产生。另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含 DNA 的水相、中间的变 性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。 用乙醇沉淀 DNA 时，为什么加入单价的阳离子？ 用乙醇沉淀 DNA 时，通常要在溶液中加入单价的阳离子， 如 NaCl 或 NaAc ，Na + 中和 DNA 分子上的负电荷，减少 DNA 分子之间的同性电荷相斥力，而易于聚集沉淀。 氯仿的作用主要是使蛋白变性并有助于液相与有机相的分开， 异戊醇 的作用是消除抽提过程中出现的泡沫